一种富硒猴头菌菌丝体多糖的精制工艺

摘要

本发明涉及一种富硒猴头菌菌丝体多糖的精制工艺。它与常见的猴头菇多糖在结构组成上有较大的不同，目前对于猴头菌菌丝体多糖的相关研究少有报道。利用本发明生产的猴头菌菌丝体，在菌丝体的生长过程中添加硒元素，提取菌丝体多糖之后，既能够发挥猴头菌菌丝体多糖类物质的生物活性作用，同时，也可以发挥硒元素的微量元素调节功能。所以，本发明制备的富硒猴头菌菌丝体多糖能够在食品抗菌添加剂、降糖药品添加剂、机体免疫调节保健品等方面具有广阔的应用前景。

主权项

一种富硒猴头菌菌丝体多糖的精制工艺，其特征在于，包括以下步骤：（1）猴头菌菌种的活化：将购买于中国普通微生物菌种保藏管理中心的编号为5.0058猴头菌菌种，利用PDA固体试管培养基活化，培养条件为25℃‑28℃培养箱中静置培养96小时‑144小时，获得活化后的猴头菌菌种；（2）猴头菌的液体初级发酵：将步骤（1）中的活化后的猴头菌菌种，无菌条件下转接于液体初级发酵培养基中，1L猴头菌液体初级发酵培养基含有葡萄糖20g、蛋白胨0.3g、酵母膏0.6g、KH₂PO₄ 2g、MgSO₄·7H₂O 1.5g、亚硒酸钠0.125g，加蒸馏水至1L，分装灭菌之后使用，转接之后在25℃‑28℃培养箱中进行液体初级发酵培养15天‑20天，获得猴头菌液体初级发酵产物；（3）猴头菌的液体大规模发酵；将步骤（2）获得的猴头菌液体初级发酵产物，在无菌条件下挑取一块菌丝片，转接于一个装有50mL猴头菌液体大规模发酵培养基的500mL三角瓶中，1L猴头菌液体大规模发酵培养基含有葡萄糖25g、蛋白胨0.4g、酵母膏0.6g、KH₂PO₄ 2g、MgSO₄·7H₂O 1.5g、亚硒酸钠0.25g，加蒸馏水至1L，分装灭菌之后使用，转接之后在25℃‑28℃培养箱中静置培养15天‑20天，获得富硒猴头菌液体大规模发酵产物；（4）富硒猴头菌菌丝体的收集：将步骤（3）获得的富硒猴头菌液体大规模发酵产物，在无菌条件下利用纱布进行过滤收集菌丝体，再利用蒸馏水清洗3‑5次，并且尽可能多的除掉水分，然后，将猴头菌菌丝体置于35℃‑40℃干燥培养箱中进行干燥处理24小时‑48小时，获得干燥处理后的猴头菌菌丝体；（5）富硒猴头菌菌丝体的粉碎：将步骤（4）获得的干燥处理后的猴头菌菌丝体，利用洁净的研钵进行研磨处理，研磨到成为较细的粉末状为止，获得富硒猴头菌菌丝体粉末；（6）富硒猴头菌菌丝体粗多糖的提取：称取步骤（5）获得的富硒猴头菌菌丝体粉末5g，在500mL的玻璃烧杯中加入150mL‑250mL的蒸馏水，在恒温水浴锅中进行50℃‑70℃恒温浸提3h‑5h，之后，按照体积比为1:1的比例加入无水乙醇进行粗多糖的沉淀，然后，10000rpm离心收集粗多糖，最后沉淀在35℃‑40℃的恒温培养箱中进行粗多糖的干燥处理，获得富硒猴头菌菌丝体粗多糖；（7）富硒猴头菌菌丝体多糖的精制：将步骤（6）获得的富硒猴头菌菌丝体粗多糖2g，按照体积比为25:24:1的比例配制的苯酚‑氯仿‑异戊醇混合液20mL，进行室温浸泡处理3h‑5h，之后将混合液进行10000rpm离心，收集上层液体，利用分子截留能力为3500KDa的透析袋对蒸馏水透析24h，之后，按照体积比为1:1的比例加入无水乙醇进行多糖的沉淀，然后，10000rpm离心收集多糖，最后沉淀在35℃‑40℃的恒温培养箱中进行多糖的干燥处理，获得富硒猴头菌菌丝体精制多糖。