一种观测融合蛋白长距离转运至水稻叶芽的方法

摘要

本发明公开了一种观测融合蛋白长距离转运至水稻叶芽的方法，该方法将GFP融合蛋白处理水稻根尖后，处理过根尖的水稻植株叶芽进行冷冻切片，切片后PI荧光染料进行染色，共聚焦显微镜直接观测GFP融合蛋白从水稻根尖转运至叶芽。该方法利用GFP融合蛋白处理水稻根尖0.5cm处，叶芽被冷冻切片后PI染色，共聚焦显微镜观测GFP融合蛋白从水稻根尖转运至叶芽，能直接定性地了解GFP融合蛋白在水稻植株内的长距离转运情况。GFP融合蛋白直接处理水稻根尖0.5cm处，共聚焦显微镜观测GFP融合蛋白转运至叶芽可为进一步开展效应蛋白能引起水稻系统防御反应提供非常强有力的证据。该方法简便、准确、快速。

主权项

一种观测融合蛋白长距离转运至水稻叶芽的方法，其特征在于，该方法将GFP融合蛋白处理水稻根尖后，处理过根尖的水稻植株叶芽进行冷冻切片，切片后PI荧光染料进行染色，共聚焦显微镜直接观测GFP融合蛋白从水稻根尖转运至叶芽；该方法的具体步骤是：5.0mg/ml的GFP融合蛋白处理种子发芽至14天的水稻幼嫩植株的根尖0.5cm处24h，灭菌水漂洗4h，叶芽进行冷冻切片，PI对切片进行染色，共聚焦显微镜直接观测GFP融合蛋白在水稻植株内的转运；将稻瘟病菌效应蛋白基因表达产物于4℃离心机离心收集菌体，用新鲜配制的缓冲液悬浮菌体；在冰水浴上进行超生破碎细胞后离心收集上清；处理是将该基因的原核表达产物纯化后按照5.0mg/ml的浓度处理种子发芽至14天的黑谷幼嫩植株的根尖0.5cm处24h，灭菌水漂洗4h，叶芽进行冷冻切片，PI对切片染色，共聚焦显微镜观测GFP融合蛋白在水稻植株内的转运；共聚焦显微镜观测到GFP融合蛋白已经从水稻根尖转运到叶芽；缓冲液为20mM Tris‑HCl，pH7.4；200mM NaCl；1mM EDTA；10mM β‑巯基乙醇。