使用染色体非整合型病毒载体制造经初始化的细胞的方法

摘要

本发明的目的是提供用于简便且有效地制造染色体上未整合外源基因的ES样细胞的载体。发现了使用染色体非整合型病毒载体从体细胞制作ES样细胞的方法。上述制作的ES样细胞的染色体上未整合外源基因，因而不仅适合用于利用本细胞进行的试验、研究，还可以在疾病的治疗中避免免疫排斥问题和伦理层面的问题。

主权项

一种用于在体细胞的初始化中向该细胞中导入基因的方法，其中使用一种或多种具有温度敏感性突变的仙台病毒载体将至少下述三种基因：Oct3/4、Klf4和Sox2基因；至少下述四种基因：Oct3/4、Klf4、Sox2和Myc基因；或至少下述四种基因：Oct3/4、Sox2、Nanog和Lin28基因导入所述细胞，其中所述仙台病毒载体缺少F基因，并且包含下述突变：(a)M蛋白中的G69E、T116A和A183S，HN蛋白中的A262T、G264R和K461G，P蛋白中的L511F，以及L蛋白中的N1197S和K1795E，且(1)所述方法还包括在初始化后通过在37.5℃‑39℃培养所述细胞来除去所述载体，或(2)所述仙台病毒载体还具有下述突变：(i)L蛋白中的Y942H、L1361C和L1558I；(ii)P蛋白中的D433A、R434A和K437A，以及L蛋白中的L1558I；(iii)P蛋白中的D433A,R434A和K437A，以及L蛋白中的L1361C；或(iv)P蛋白中的D433A、R434A和K437A；以及L蛋白中的L1558I和L1361C；或(b)L蛋白中的Y1214F。