发明名称 |
一种大豆球蛋白的直接ELISA检测法的构建方法及应用 |
摘要 |
本发明涉及一种大豆球蛋白的直接ELISA检测法的构建方法及应用。所述一种大豆球蛋白的直接ELISA检测法的构建方法通过优化直接ELISA检测法的参数,包括包被抗原为1μg/mL,抗体最适稀释度1:800;最佳封闭时间为60.42min,酶标抗体最佳反应时间为149.63min,底物液作用最佳反应时间为15.03min,最终绘制直接ELISA检测法的标准曲线。在应用直接ELISA检测法测量时,将待测大豆球蛋白溶液先后与大豆球蛋白特异多克隆一抗、将酶标记抗兔IgG作为酶标二抗进行反应,再加入底物液显色,用标准曲线进行判断,直接得到待测大豆球蛋白溶液的大豆球蛋白含量。该检测方法具有简单,快速、成本低,耗时短等特点,可应用于大豆及其深加工产品中大豆球蛋白含量的检测。 |
申请公布号 |
CN104865388A |
申请公布日期 |
2015.08.26 |
申请号 |
CN201510271474.4 |
申请日期 |
2015.05.25 |
申请人 |
吉林农业大学 |
发明人 |
赵元;鲍男;张诗尧;秦贵信;娜仁高娃;车东升 |
分类号 |
G01N33/68(2006.01)I |
主分类号 |
G01N33/68(2006.01)I |
代理机构 |
合肥顺超知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 34120 |
代理人 |
杨天娇 |
主权项 |
一种大豆球蛋白的直接ELISA检测法的构建方法,包括以下步骤:⑴包被抗原的获取:用包被缓冲液稀释不同浓度的大豆球蛋白,在聚苯乙烯板的反应孔中加100μl,4℃过夜,洗涤,获得包被抗原;⑵封闭:每孔加入封闭液于37℃进行封闭,封闭时间为1~2h,洗涤;⑶加样:加入不同浓度的大豆球蛋白特异多隆抗体与相应的抗原结合,每孔100μl,置37℃孵育1h,洗涤;⑷加酶标二抗:将辣根过氧化酶标记抗兔IgG用抗体稀释液稀释5000倍,取100μl加入不同反应孔中,37℃,酶标二抗作用时间为2h,洗涤;⑸加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液100μl,37℃,底物液作用时间为15min~25min;⑹终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸50μl;(7)绘制标准曲线。 |
地址 |
130000 吉林省长春市新城大街2888号 |