利用转基因动物乳腺生物反应器生产单克隆抗体的方法

摘要

本发明涉及一种利用转基因动物乳腺生物平台大规模生产重组单克隆抗体的方法。具体地，本发明提供了一种用于乳腺特异性表达的抗体元件构建物或表达盒，当所述构建物或表达盒整合入哺乳动物细胞后，经核移植使转基因哺乳动物乳腺表达并分泌所述的外源重组抗体蛋白，从而制得易于分离和纯化的单克隆抗体。本发明方法简单、高效，所产生的重组单克隆抗体能广泛应用于于诊断、预防、治疗癌症和许多其他重大疾病及免疫机制研究，尤其是恶性肿瘤治疗或自身免疫性疾病治疗领域。

主权项

一种用于乳腺特异表达的供体构建物，其特征在于，所述构建物从5’至3'，依次包括可操作性连接的式I中所示的元件：A1‑B1‑C1‑D1‑E‑F1  (式I)式中，(i)A1为5'同源臂序列，所述5'同源臂序列选自哺乳动物乳腺特异表达蛋白基因组序列，所述的哺乳动物乳腺特异表达蛋白包括：乳清酸性蛋白(WAP)，αS1‑酪蛋白，αS2‑酪蛋白，β‑酪蛋白，κ‑酪蛋白，β‑乳球蛋白和α‑乳清蛋白；(ii)B1为剪接接受位点序列；(iii)C1为含Kozak序列，信号肽编码序列和重组蛋白的编码序列，所述重组蛋白编码序列编码形成抗体的抗体元件，其中所述的抗体元件选自下组：抗体轻链、抗体重链、单链形式或完整的单克隆抗体；(iv)D1为终止密码子以及位于所述密码子下游的抗体蛋白cDNA 3’末端UTR序列；(v)E为抗性基因以及位于抗性基因两侧的Cre－loxP序列；(vi)F1为位于基因定点整合位点下游的3'同源臂序列,所述的3'同源臂序列选自哺乳动物乳腺特异表达蛋白基因组序列，所述的哺乳动物乳腺特异表达蛋白包括：乳清酸性蛋白(WAP)，αS1‑酪蛋白，αS2‑酪蛋白，β‑酪蛋白，κ‑酪蛋白，β‑乳球蛋白和α‑乳清蛋白；并且所述5'同源臂序列和3'同源臂序列来自同一蛋白的基因组序列，并且用于将外源基因定点整合入所述蛋白基因组序列的内含子1区域。