一种重组猪α干扰素的制备方法

摘要

本发明构建并筛选获得了一株可以高效分泌表达猪α干扰素的重组毕赤酵母菌株PoIFN-α/GS115，克服了以大肠杆菌表达和制备重组干扰素存在纯化工艺复杂和生物学活性不高等问题，并建立了区别于传统高密度发酵工艺的，适于目的基因高效表达的特有发酵工艺。该发酵工艺生产周期短，纯化工艺简单且成本低。

主权项

一种重组猪α干扰素的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）人工合成猪α干扰素基因，构建重组质粒，并将重组质粒转化到毕赤酵母细胞中，获得重组菌株；（2）发酵培养和诱导表达a. 种子培养；b. 将种子液接种于发酵罐中；c. 重组菌株在种子液和发酵表达培养基的混合液中生长2h‑4h；d. 待发酵培养基中的甘油和甲醇消耗殆尽，表现为溶氧呈现持续上升的趋势，或陡然上升至100%，开始补加甲醇，以0.5ml/L/hr ‑ 2.5ml/L/hr的速度向发酵表达培养基中补加甲醇；e. 蛋白达到最大表达量后，收集表达液；（3）检测重组猪α干扰素的活性其中步骤（2）d中，补加甲醇的方法为：第1小时，以0.5ml/L/hr的速度补加甲醇；第2小时，以0.75ml/L/hr的速度补加甲醇；第3小时，以1‑1.5ml/L/hr的速度补加甲醇；第4小时，以1‑1.5ml/L/hr的速度补加甲醇；第5小时，以1.5‑1.8ml/L/hr的速度补加甲醇；第6小时，以1.5‑1.8ml/L/hr的速度补加甲醇；第7小时，以2‑2.5ml/L/hr的速度补加甲醇；然后保持2ml/L/hr的速度直至达到蛋白最大表达量。