一种三磷酸腺苷二钠的生产方法

摘要

本发明公开了一种三磷酸腺苷二钠的生产方法，本发明是用适量室温的反渗透水溶解腺苷制成腺苷溶液，不仅节约能耗15％以上，而且操作简单且有效的避免了对酶的损害。现有技术中，在树脂分离工序的上样时，是采用单条树脂柱上样至结束，单条树脂柱上样会有很多弊端，比如单条树脂柱上样往往容易流穿且流速需实时控制、延长了上样时间而且产品量还收率较低；而本发明采用串柱上样可以显著提高流速，缩短上样时间50％以上，且因为是串柱洗涤，产品流穿的可能性也小了很多，极大的提高了产品的收率，收率提高30％以上。

主权项

一种三磷酸腺苷二钠的生产方法，其特征在于，包括如下步骤：1)生化反应(1)硫酸镁溶液、腺苷溶液、苯扎溴铵溶液的制备：①用少量反渗透水溶解硫酸镁制成硫酸镁溶液；②用适量室温的反渗透水溶解腺苷制成腺苷溶液；③用适量的反渗透水溶解苯扎溴铵稀释成5％苯扎溴铵溶液；(2)投放速冻酵母：加反渗透水于反应锅中，开动搅拌用夹套热水加热至40‑45℃，投放蔗糖及磷酸二氢钾和磷酸氢二钾，使其溶解，待其全部溶解后，停止加热，开循环水降温，当温度降至40℃以下时，投放速冻酵母，并用夹套热水缓慢升温；所述的速冻酵母，是指将啤酒酵母泥用适量反渗透水清洗，然后再用板框过滤器过滤，得到白色或淡褐色泥状物，再通过速冻得到；(3)ATP生化反应：当反应锅内温度升至20℃±1时，依次投放硫酸镁溶液、苯扎溴铵溶液、腺苷溶液，反应开始计时，将反应液继续加热至36‑39℃，保温，待有气泡溢出，开始取样测定ATP转化率，当反应达到ATP－条带时，反应结束；(4)灭活、调酸碱：反应结束，立即放掉夹套热水，迅速投放大量冰于反应锅内，并通冷却水降温，当温度降至4℃以下，用磷酸调pH至2.5‑3.0，1小时后，再用液碱调pH至5.5‑6.0，调好碱后30分钟开始压榨，压榨完毕，再用反渗透水顶洗滤饼，水顶液合并压榨液，检验含量、透光度，合格送分离工段处理；2)树脂分离(1)串柱上样：将压榨液及水顶液稀释至0.2‑0.45％，上D296树脂柱，流速为4‑6L/min，定时检测流出液，查看是否有ATP漏出；当流出液中ATP浓度≥0.03％时，停止上样，用反渗透水正顶至流出液ATP浓度≤0.01％后，继续上样，如此反复直至上样结束；(2)水洗杂质：串柱上样结束，用反渗透水正进洗涤至流出液A_257nm≤0.2；然后反进水洗至树脂上层无浑浊机械杂质且流出液A_257nm≤0.2后结束；流速控制在4‑6L/min；(3)稀盐洗杂质：水洗结束，用pH2.0‑2.2的0.04mol/LNaCl‑‑0.01mol/L HCl稀盐液反进流洗，流速为6‑10L/min；每小时取样，测流出液中ATP浓度，当流出液中ATP浓度≥0.03％时，反进洗杂质结束；改正进，正进流速不变，每小时取样一次，测流出液中ATP的浓度，当流出液中ATP浓度≥0.025％时，每半小时取样一次监测；当流出液pH跳至2‑4，且ADP基本洗尽或只有ATP时，洗涤结束，开始洗脱；(4)洗脱：用pH3.5‑3.8的1mol/LnaCl‑0.01mol/L HCl浓盐液进行洗脱，当洗脱流出液ATP浓度>0.38％时，收集洗脱液，送脱色；当洗脱流出液ATP浓度<0.38％时，即停止收集；3)精制(1)脱色：洗脱液根据色泽加入0.1‑0.5％活性炭和0.1‑0.3％硅藻土搅拌1小时脱色，离心分离过滤后，脱色液经检验合格后送超滤除蛋白；(2)超滤：将脱色液用<1万分子量的超滤膜进行超滤除蛋白，合格后送去结晶；(3)结晶：超滤液先用CP级HCl调pH至2.5‑3.3，再用＞1万分子量的超滤膜进行超滤除蛋白，合格后放入结晶釜，开动搅拌，开始加入95％(v/v)乙醇，出现白色混浊前酒精加入速度控制在100L/h；出现白色混浊时，停止加酒精，搅拌半小时，然后继续加酒精至料液体积的1.5‑2.0倍，保持温度搅拌半小时，然后开夹套冷却水，将料液冷至室温，静止1小时；离心分离结晶液，湿品先用95％(v/v)酒精洗涤，再用无水乙醇浸泡，最后甩干送去干燥；母液调pH至6.0‑7.0后送蒸馏工段进行回收酒精；4)干燥包装(1)干燥：将湿品放入干燥箱中，真空度≤－0.085Mpa，控制温度在34‑40℃，加P₂O₅吸湿，烘干过程定时翻料，并检测水分，当水分≤8％时可出料；(2)包装：将合格的产品按规定的批量放入混合器中混合15‑20分钟，然后按进行包装送检，合格入库。