月季试管苗试管内开花及雌蕊单性开花的方法及其培养基

摘要

本发明公开了一种月季试管苗试管内开花及雌蕊单性开花的方法及其培养基，包括以下步骤①继代培养获得的无根试管苗；②月季无根试管苗二倍体试管内开花；③月季试管苗二倍体花雌蕊诱导开花；该方法可使二倍体试管苗开花率达到50％左右；可使二倍体花和雌蕊单倍体花呈塔式开放并且同时存在20～35d、开花率达到30％左右。

主权项

一种月季试管苗试管内开花的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将适合陕北地区栽种的月季品种“月月红”当年生的茎段，经过无菌处理接入人工制作的MS培养基中，通过初代培养获得第一代无根试管苗；然后在MS培养基中加入1.2mg/L的6‑苄氨基腺嘌呤6‑BA和0.15mg/L的3‑吲哚丁酸IBA，在光照强度为1500lx±200lx、相对湿度70％±5％、温度为24℃的条件下继代培养25d；获得繁殖系数不低于6.8的无根试管苗；(2)将继代培养获得的无根试管苗转接在不含外源激素的MS培养基上培养6～8d，再转入含脱落酸0.02mg/L的MS培养基中；通过变温培养，培养条件为：前5d在散光照射下培养，温度维持早晨8:00～14:00持续升温从18℃到26℃，26℃维持2h，然后逐步降温从16:00～19:00温度降到20℃，从19:00至晚上23:00温度降到12℃，维持12℃至次日8:00；在光照强度为1500lx±300lx、相对湿度70％±5％；从第6d开始转为8:00～20:00恒温25℃，夜间逐步降温从20:00～0:00温度降到18℃，0:00～4:00温度降到16℃，维持16℃至8:00；在光照强度为1500lx±300lx、相对湿度70％±5％；(3)将步骤(2)获得的月季试管苗接入诱导开花的培养基中，采取变温培养，前7d散光培养在光照强度为1500lx±300lx、相对湿度70％±5％；从第8d开始转为8:00～20:00恒温25℃，夜间逐步降温从20:00～0:00温度降到18℃，0:00～4:00温度降到16℃，维持16℃至8:00；在光照强度为1500lx±300lx、相对湿度70％±5％；待形成花苞后维持日夜恒温24℃培养；二倍体开花后重复变温培养方式8:00～20:00恒温25℃，夜间逐步降温从20:00～0:00温度降到18℃，0:00～4:00温度降到16℃，维持16℃至8:00；在光照强度为1500lx±300lx、相对湿度70％±5％，5d后由雌蕊形成单性花蕾，转为维持日夜恒温24℃培养；培养2～5d后开放；所述诱导开花的培养基成分如下：氯化钙CaCl₂·2H₂O 315mg/L，硝酸氨NH₄NO₃ 1200mg/L，硝酸钾KNO₃ 1800mg/L，硫酸镁MgSO₄·7H₂O 300mg/L，磷酸二氢钾KH₂PO₄ 200mg/L，硫酸亚铁FeSO₄·7H₂O 29mg/L，乙二胺四乙酸二钠Na₂EDTA 40mg/L，硼酸H₃BO₃ 20mg/L，硫酸锰MnSO₄·H₂O 120.0mg/L，硫酸锌ZnSO₄·7H₂O 11.0mg/L，钼酸钠Na₂MoO₄·2H₂O 0.30mg/L，硫酸铜CuSO₄·5H₂O0.030mg/L，盐酸硫胺素维生素B1 1.2mg/L，盐酸吡哆辛维生素B6 0.6mg/L，烟酸0.6mg/L，肌醇120mg/L，氨基乙酸5.0mg/L，蔗糖25g/L，琼脂5.5g/L，6‑苄氨基腺嘌呤6‑BA 0.5mg/L，脱落酸ABA0.001mg/L，3‑吲哚乙酸IBA 0.2mg/L，pH＝5.8；所述的月季R.chinensis为蔷薇科Rosaceae蔷薇属Rosa，在陕北野生的月季花。