奶牛乳房炎主要致病菌四重PCR快速检测试剂盒

摘要

本发明公开了一种奶牛乳房炎主要致病菌四重PCR快速检测试剂盒，包括由四对特异性引物构成的引物对组。应用本发明结合多重PCR技术可一次性同时扩增致病性无乳链球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、蜡样芽孢杆菌的特异性基因sip、nuc、rrnB和HblA，再通过琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物，能对奶样中存在的主要病原菌进行全面、高效、准确的检测与鉴定。本发明克服了常规病原菌检测技术操作繁琐、费时耗力等缺点，增加病原菌检查的种类，提高了检测的特异性和灵敏度，具有比常规检测方法更特异、更敏感的特点，适合在基层兽医站和奶牛养殖场中进行快速检测，具有较好的应用前景。

主权项

一种奶牛乳房炎主要致病菌四重PCR快速检测试剂盒，其特征在于包括由四对特异性引物构成的引物对组；四对特异性引物分别是鉴定无乳链球菌sip基因的引物对sip‑F和sip‑B，鉴定金黄色葡萄球菌Nuc基因的引物对Nuc‑F和Nuc‑B，鉴定大肠杆菌rrnB基因的引物对rrnB‑F和rrnB‑B，鉴定蜡样芽孢杆菌HblA基因的引物对HblA‑F和HblA‑B；所述引物对sip‑F和sip‑B、引物对Nuc‑F和Nuc‑B、引物对rrnB‑F和rrnB‑B、引物对HblA‑F和HblA‑B的特异性引物分别具有序列表SEQ.ID.No.1和2、4和5、7和8、10和11的碱基序列；该试剂盒包括以下试液：A试液：含10×PCR缓冲液、MgCl₂、dNTPs和四对特异性引物；B试液：含无乳链球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和蜡样芽孢杆菌的DNA,作为阳性对照；C试液：去离子水，作为阴性对照；所述A试液每管42μl，含10×PCR缓冲液5μl、2.5mM MgCl₂5μl、2.5mmol/L的dNTPs 4μl、四对特异性引物包括：无乳链球菌上游和下游引物各2μl、金黄色葡萄球菌上游和下游引物各2μl、大肠杆菌上游和下游引物各2μl、蜡样芽孢杆菌上游和下游引物各2μl，引物浓度均为10μmol/L，5U/μl Taq酶0.5μl，去离子水11.5μl。