柳杉茎段组织培养获得再生植株的方法

摘要

本发明涉及植物组织培养繁殖技术领域，具体涉及一种柳杉茎段组织培养获得再生植株的方法，包括如下步骤：（1）外植体消毒；（2）诱导培养；（3）增殖培养；（4）生根壮苗培养；（5）炼苗移栽。本发明采用柳杉茎段为外植体进行组织培养，能够通过选择优良母株进行取材，快速获得大量遗传背景完全一致的优良群体；组织培养能有效保持母株的优良性状，且生产不受季节限制，是工厂化育苗的主要形式，能够在短期内培育大量的优良种苗。本技术将有力推动柳杉无性系良种的选育、繁殖和推广应用，促进柳杉人工林的健康快速发展。

主权项

一种柳杉茎段组织培养获得再生植株的方法，其特征是，包括如下步骤：(1)外植体消毒：取茎段材料，用洗涤剂溶液浸泡25～35min，将表面灰尘用毛刷轻轻刷去，并剪成独立的带顶芽的小枝条，长度5cm，将枝条置于烧杯中，流水冲洗3～3.5h，吸干水分，再用浓度为0.2％的多菌灵溶液浸泡30～35min，用蒸馏水清洗2次，放入无菌培养室进行无菌消毒，在超净工作台下用浓度为75％的酒精消毒10～20s后，再用0.1％的升汞浸泡6～8min，然后用无菌水清洗4～6次，用无菌纱布吸干备用；(2)诱导培养：截取2～3cm的茎段，剪去针叶长度的2/3，接入诱导培养基中，先置于黑暗培养箱中培养72～120h，再置于光照培养箱中培养，10～20d即有芽开始膨大萌动，40～50d长出丛生芽；(3)增殖培养：将诱导产生的丛生芽分株，每株含3～5个芽，接种到增殖培养基上，置于光照培养箱内培养，45d后产生大量丛生芽，继续进行分株增殖培养；(4)生根壮苗培养：在丛生芽中，剪取3～5cm带顶芽的材料，接种到生根培养基中，置于光照培养箱中培养25～35d，获得生长健壮且具有效根的幼苗；(5)炼苗移栽：将已经生根的幼苗置于自然光下驯化培养20～25d，打开瓶盖，将幼苗小心取出栽种，栽种基质为河砂，25～35d后长出新的嫩芽，幼苗成活；所述步骤(2)中的诱导培养基为WPM基本培养基+6‑BA 0.5‑1.0mg.L^‑1+IBA0‑0.05mg.L^‑1+蔗糖30g.L^‑1+琼脂7g.L^‑1；所述步骤(3)中的增殖培养基为WPM基本培养基+6‑BA 0.25‑0.5mg.L^‑1+IBA0‑0.02mg.L^‑1+蔗糖30g.L^‑1+琼脂7g.L^‑1；所述步骤(4)中的生根培养基为1/2WPM基本培养基+NAA 0.01‑0.03mg.L^‑1+IBA0‑0.02mg.L^‑1+蔗糖30g.L^‑1+琼脂7g.L^‑1。