一种高效检测纳米颗粒肾毒性的方法

摘要

本发明公布了一种高效检测纳米颗粒肾毒性的方法，该方法包括如下步骤：1）制备图案化纤维电纺接收板，利用光刻蚀技术和直流磁控溅射技术，制备具有图案化金属银层的接收板；2）制备图案化电纺纤维，利用步骤1）所得物进行静电纺丝；3）制备PDMS腔体；4）将步骤2）和步骤3）所得物用等离子处理进行连接；5）将原代小鼠肾小管上皮细胞接种于步骤4）所得物中的图案化电纺纤维上，利用注射泵将培养基泵入步骤4）所得物的腔体，再将纳米颗粒泵入,于纳米颗粒泵入后20天内记录各种毒性指标。本发明可以实现高效、高精度的纳米颗粒肾毒性检测，检测效果与体内动物实验一致；相对于体内动物实验更加快捷。

主权项

一种高效检测纳米颗粒肾毒性的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：1）制备图案化纤维电纺接收板：先在绝缘玻璃片上涂覆正性感光胶，再覆盖一层光掩模，利用光刻机进行刻蚀；再通过直流磁控技术在刻蚀后的玻璃片上沉积一层金属银，所沉积的金属银的形状包括圆形阵列、椭圆形的一种，圆形半径为100 μm‑500μm，椭圆长轴为200 μm‑600μm，短轴为100 μm‑300μm；最后清洗掉剩余的正性感光胶；2）制备图案化电纺纤维：将医用高分子聚合物用有机溶剂溶解，利用步骤1）所得物作为电纺接收板，通过静电纺丝技术制备圆形或椭圆形的图案化电纺纤维；控制所得纤维的直径为300‑500 nm；    所述医用高分子聚合物包括聚乳酸、聚己内酯、聚氨酯、聚丙烯腈中的一种，所述有机溶剂包括丙酮、二甲基甲酰胺中的至少一种；3）将负性环氧树脂型近紫外线光刻胶SU‑8放置在硅片上，利用光刻蚀技术，保留宽为40‑550μm、高为30‑80μm的SU‑8长方体作为模具，去掉其余的SU‑8，；将熔融的PDMS置于所得模具上，待PDMS冷却后，去除模具，得到PDMS腔体；4）将步骤2）和步骤3）所得物在O₂ 或N₂的氛围下，用等离子体处理30秒，使得步骤2）和步骤3）所得物紧密连接；5）将0.5×10⁶‑1.5×10⁶个原代肾小管上皮细胞接种于步骤4）所得物中的图案化电纺纤维上，利用注射泵将培养基泵入步骤4）所得物的腔体，流速为0.2‑0.5 ml/h；再将纳米颗粒悬浮于PBS后泵入,于纳米颗粒泵入后，记录原代肾小管上皮细胞的存活率、细胞形态学、乳酸脱氢酶、谷胱甘肽、丙二醛、超氧化物歧化酶的测定结果、细胞凋亡和周期的变化、细胞内氧自由基、酶活力、特征基因表达水平，得出纳米颗粒的毒性；所述纳米颗粒包括纳米四氧化三铁、纳米二氧化钛、纳米氧化锌、纳米二氧化硅、纳米银颗粒中的一种。