一种重组单纯疱疹病毒的纯化方法

摘要

一种重组单纯疱疹病毒的纯化方法，将在Vero细胞中扩增得到的重组单纯疱疹病毒上清液中加入5%的PEG8000，离心；沉淀用TNMC缓冲液溶解，并在溶液中加入n-十二烷基-β-D-麦芽苷促进沉淀的溶解；将浓缩的mtHSV溶液加于蔗糖密度梯度顶层，离心鉴定分析。本发明的优点：本方法结合了沉淀法和蔗糖密度梯度离心法，具有低成本，对病毒无损伤，纯化效果好等特性，成为一个可以推广开来的有效的病毒纯化方法。

主权项

一种重组单纯疱疹病毒的纯化方法，其特征在该方法包括如下步骤：(I).将在Vero细胞中扩增得到的重组单纯疱疹病毒上清液中加入5%的PEG8000，4^oC搅拌6个小时或过夜，4^oC 13500g离心2小时；(II).沉淀用TNMC缓冲液溶解，并在溶液中加入n‑十二烷基‑β‑D‑麦芽苷促进沉淀的溶解；(III).制备蔗糖密度梯度，将浓缩的mtHSV溶液加于蔗糖密度梯度顶层，37 500 g 离心力在4^oC离心18小时；(IV).将离心管底部刺穿，按一定体积量等体积收集，收集10管，取每管收集液的一部分做蛋白质电泳染色和Western blotting鉴定分析，将经鉴定分析确定了的病毒含量和纯度高的收集管冻存于‑80^oC或液氮罐中。