一种酶活性提高的丙酮酸羧化酶突变体P474N及其应用

摘要

本发明公开了一种酶活性提高的丙酮酸羧化酶突变体P474N及其应用，属于遗传工程和发酵工程领域。本发明将米根霉的丙酮酸羧化酶的P474位点突变成了天冬酰胺，得到的突变体酶活提高了12.8％。在敲除PDC1和ADH1的基础上敲除基因FUM1，同时过量丙酮酸羧化酶突变体P474N，发现延胡索酸产量提高了13.3％。同时通过添加64μg/L的生物素，延胡索酸产量达到357mg/L，较不添加生物素时(256.7±3.0mg/L)提高了37％。该发明有效强化了碳代谢流由丙酮酸进入延胡索酸的合成途径，为构建工程酵母高效生产延胡索酸及其它二元羧酸创造了条件，具有很好的工业应用价值和前景。

主权项

一种丙酮酸羧化酶突变体，其特征在于，所述突变体是在氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的米根霉丙酮酸羧化酶的基础上，对第474位的氨基酸进行了突变。