一种合金负载分子筛电化学免疫传感器的制备方法及应用

摘要

本发明涉及一种合金负载分子筛电化学免疫传感器的制备方法及应用，属于新型功能材料、生物传感检测技术领域。哌嗪修饰的氨基化石墨烯的引入显著改善了电极的性能，增强了电极的电子传输能力；合金负载分子筛SAPO-34-Pd/Co比表面积大，生物相容性好，催化效率高等特点，显著提高了免疫传感器的灵敏度和稳定性，对肿瘤的早期诊断具有重要的意义。

主权项

一种合金负载分子筛电化学免疫传感器的制备，其特征在于，包括以下步骤：（1）哌嗪修饰的氨基化石墨烯的壳聚糖溶液的制备将0.5 ~ 2.0 mg哌嗪修饰的氨基化石墨烯加入到1 mL、0.1%的壳聚糖溶液中，超声分散10 ~ 20 min，将溶液保存在4 ℃下备用；所述0.1%的壳聚糖溶液，是将1 g的壳聚糖溶于10mL、0.02mol/L的稀盐酸溶液中；（2）SAPO‑34‑Pd/Co‑Ab₂二抗孵化物的制备1）氨基化分子筛的制备称取0.05~1.5 g SAPO‑34于三口烧瓶中，加入0.1~3 mL的3‑氨丙基三乙氧基硅烷和10 mL的无水乙醇，将混合物加热到70 ℃并保持1.0~2.0 h，然后冷却到室温，混合物经7000 rpm下离心分离5 min，制得氨基化的分子筛NH₂‑SAPO‑34，用水洗涤并离心分离三次，最后将氨基化的分子筛在35~45℃下真空干燥；2）SAPO‑34‑Pd/Co的制备在氮气保护和冰浴冷却下，将3~6 mL、0.2 mol/L的硝酸钴，2.5 mL、64 mmol/L的柠檬酸钠，20 ~40 mg NH₂‑SAPO‑34和25 mL超纯水混合超声20 min；将5 mL、1.6 mol/L的硼氢化钠溶液以20 mL/h的速率加到上述混合液中并强力搅拌，制得Co纳米粒子溶液；将10 mL、30~60 mmol/L四氯钯酸钠Na₂PdCl₄和10 mL、0.16 mol/L的NaBH₄溶液同时以20 mL/h的速率加到Co纳米粒子溶液中，混合物再搅拌1 h，然后分离洗涤，并在35 ℃下真空干燥，制得SAPO‑34‑Pd/Co；3）SAPO‑34‑Pd/Co‑Ab₂二抗孵化物溶液的制备将1~3 mg的SAPO‑34‑Pd/Co分散到1 mL超纯水中，加入100 μL、80~120 μg/mL的二抗Ab₂和900 μL、40~60 mmol/L的pH 7.4磷酸盐缓冲溶液，4℃恒温振荡培养箱中振荡孵化12 h，在4 ℃下、6000 rpm转速下离心15 min，得到下层沉淀；再加入1 mL、50 mmol/L 的pH=7.4磷酸盐缓冲溶液离心洗涤1次，得下层沉淀；最后加入1 mL、50 mmol/L的pH=7.4磷酸盐缓冲溶液，制得SAPO‑34‑Pd/Co‑Ab₂二抗孵化物溶液，4 ℃下保存备用。（3）一种合金负载分子筛电化学免疫传感器的制备1）将直径为4 mm的玻碳电极用Al₂O₃抛光粉打磨，超纯水清洗干净；取6 µL、0.5 ~ 2 mg/mL的哌嗪修饰的氨基化石墨烯的壳聚糖溶液滴加到电极表面，室温下晾干，用超纯水冲洗电极表面，晾干；滴加3 µL、质量分数为1.0~2.5%的戊二醛溶液连接抗体和哌嗪修饰的氨基化石墨烯；2）在步骤1）修饰的工作电极表面滴加6 µL、5~10 µg/mL的肿瘤标志物一抗，超纯水冲洗电极表面，4 ℃冰箱中晾干；3）在步骤2）修饰的工作电极表面滴加6 µL、质量分数为1~2%的BSA溶液，封闭电极表面上非特异性活性位点，超纯水冲洗电极表面，4 ℃冰箱中晾干；4）在步骤3）修饰的工作电极表面滴加6 µL、0.001~20 ng/mL的一系列不同浓度的肿瘤标志物抗原溶液，超纯水冲洗电极表面，4 ℃冰箱中干燥；5）在步骤4）修饰的工作电极表面滴加6 µL SAPO‑34‑Pd/Co‑Ab₂二抗孵化物溶液，置于4 ℃冰箱中晾干，制得一种合金负载分子筛电化学免疫传感器。