一种地衣芽孢杆菌三角瓶液体发酵制备耐热阿魏酸酯酶的方法

摘要

本发明公开了一种地衣芽孢杆菌三角瓶液体发酵制备耐热阿魏酸酯酶的方法，以地衣芽孢杆菌为生产菌株，通过菌株活化、种子液培养、三角瓶发酵、酶制剂制备的工艺步骤制备耐热阿魏酸酯酶制剂，得到固体阿魏酸酯酶酶制剂稳定性好、适用范围广，制备工艺简单，酶活高，酶活力可达300U/g，总回收率达到了82%，具有极好的工业化应用前景。

主权项

一种地衣芽孢杆菌三角瓶液体发酵制备耐热阿魏酸酯酶的方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤1，菌株活化：取地衣芽孢杆菌DBM12菌株，在活化培养基平板上划线，放于40‑45℃温箱培养18‑24h，将生长好的单菌落进行再次划线，40‑45℃温箱培养18‑24h，菌株活化完成；步骤2，种子液培养：取步骤1所得活化后的平板菌种，接种于50mL一级种子培养基中，40‑45℃、180r/min振荡培养24h后，再以10v/v%接种量接种二级种子培养基，40‑45℃、80r/min振荡培养20～24h，得二级种子液；步骤3，三角瓶发酵：按照5‑10v/v%的接种量将步骤2所得二级种子液接种到80‑120mL发酵培养基中，160‑180r/min下震荡培养，发酵初始到发酵24h，培养温度控制在40‑45℃，发酵24‑36h，温度降至35‑40℃，在发酵36h时，向发酵液中补加营养液15mL，继续发酵至72h；步骤4，酶制剂的制备：将步骤3所得发酵液在4℃、8000r/min、离心20min，所得上清进行超滤浓缩，向浓缩后的粗酶液中添加2‑3wt%可溶性淀粉，搅拌，再添加8‑12wt%麦芽糊精，搅拌均匀后喷雾干燥，即得阿魏酸酯酶制剂。