一种麻附甘药物质量检测方法

摘要

本发明提供了一种麻附甘药物质量检测方法，采用薄层色谱法鉴别麻黄、甘草；采用高效液相色谱法鉴别附子并控制双酯型生物碱含量：流动相按时间进行程序梯度洗脱，与对照品混合法进行测定；采用高效液相色谱法，色谱柱以极性乙醚连接苯基键合硅胶为填充剂；采用高效液相色谱法测定麻黄、甘草含量；本发明的检测方法可有效保证该药物在生产和使用过程的质量，从而保证药品疗效。

主权项

一种麻附甘药物质量检测方法，其特征在于包括以下步骤：（1）用薄层色谱法鉴别麻黄：取检品，称取0.5‑5g，加浓氨试液数滴，再加三氯甲烷10ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml充分振摇，滤过，取滤液作为供试品溶液；另取盐酸麻黄碱对照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法中国药典2010年版一部附录Ⅵ B试验，吸取上述两种溶液各10µl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷‑甲醇‑浓氨试液=20：5：0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茚三酮试液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的红色斑点，即确定是含有麻黄的制剂；（2）用薄层色谱法鉴别甘草：取检品研细，称取0.5‑3g，加乙醚40ml，加热回流1小时，滤过，弃去醚液，药渣加甲醇30ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水40ml使溶解，用正丁醇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用水洗涤3次，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法中国药典2010年版一部附录Ⅵ B试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一用1%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯‑甲酸‑冰醋酸‑水=15：1：1：2为展开剂，阴凉处展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，即确定是含有甘草的制剂；（3）用高效液相色谱法鉴别附子：色谱条件及系统适用性试验，色谱柱以极性乙醚连接苯基键合硅胶为填充剂；以乙腈‑0.092%磷酸溶液=21：79为流动相，0.092%磷酸溶液含0.04%三乙胺和0.02%二正丁胺；检测波长为232nm；理论板数按苯甲酰新乌头原碱峰计算应不低于6000；取苯甲酰新乌头原碱对照品、苯甲酰乌头原碱对照品、苯甲酰次乌头原碱对照品适量，精密称定，加乙腈制成每1ml分别含50μg、10μg、10μg的混合溶液，作为对照品贮备液，精密量取对照品储备液5ml，置25ml量瓶中，加0.1%磷酸溶液稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液；精密量取对照品贮备液5ml，室温减压回收至干，精密加入0.1mol/L盐酸50ml使溶解，精密量取10ml，加在固相萃取柱上，固相萃取柱以混合型阳离子交换反相吸附剂为填充剂，150mg，容量为6ml，预先依次用乙腈、水各6ml洗脱，依次以水3ml、1.25%氨溶液、水、甲醇、乙腈各5ml洗脱，待洗脱液流尽后，放置5分钟，继用乙腈‑浓氨试液=90：10的混合溶液10ml洗脱，收集洗脱液，于40℃以下减压回收溶剂至干，残渣精密加入乙腈‑0.1%的磷酸溶液=20：80的混合溶液5ml使溶解，滤过，取续滤液作为固相萃取柱系统适用性试验溶液；分别精密吸取上述系统适用性试验溶液与对照品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，计算系统适用性试验溶液与对照品溶液中各相应成分峰面积的比值，不得小于0.95；取检品研细，称取0.2‑2g，置精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入0.1mol/L盐酸溶液25ml，密塞，称定重量，超声处理40分钟并时时振摇，放冷，再称定重量，用0.1mol/L盐酸溶液补足减失的重量，摇匀，转速为每分钟4000转离心30分钟，滤过，精密量取续滤液10ml，照固相萃取柱系统适用性试验项下的方法，自“加在固相萃取柱上”起，依法操作，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，供试品色谱中呈现与苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱和苯甲酰次乌头原碱对照品色谱峰保留时间相对应的色谱峰，即确定制剂中含有附子；（4）采用高效液相色谱法测定双酯型生物碱：色谱条件及系统适用性试验，色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈‑四氢呋喃=25：15为流动相A，以含0.1%磷酸的0.03mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相B；0～75分钟，流动相B由85%至80%；检测波长为232nm；理论板数按乌头碱峰计算应不低于8000；取新乌头碱对照品、次乌头碱对照品、乌头碱对照品适量，精密称定，分别加乙腈制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品贮备液，精密量取上述三种对照品贮备液各5ml，置50ml量瓶中，加0.1%磷酸溶液稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液；精密量取对照品贮备液各3ml，混匀，室温减压回收至干，残渣精密加入0.1mol/L盐酸溶液50ml使溶解，精密量取5ml，置于处理好的固相萃取柱上，固相萃取柱以混合型阳离子交换反相吸附剂为填充剂，150mg，容量为6ml，预先依次用乙腈、水各6ml洗脱，依次以0.1mol/L盐酸溶液、甲醇、乙腈各5ml洗脱，弃去洗脱液，放置5分钟，继用乙腈‑浓氨试液=90：10的混合溶液10ml洗脱，收集洗脱液，于40℃以下减压回收溶剂至干，残渣精密加入乙腈‑0.1%磷酸溶液=30：70的混合溶液3ml使溶解，滤过，取续滤液作为固相萃取柱系统适用性试验溶液；分别精密吸取上述固相萃取柱系统适用性试验溶液和对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，计算系统适用性试验溶液和对照品溶液各相应成分峰面积比值，不得小于0.95；取检品，称取0.5‑5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加乙腈‑浓氨试液=90：10的混合溶液25ml，超声处理30分钟，滤过，滤液于40℃以下减压回收溶剂至干，残渣加0.1mol/L盐酸溶液10ml使溶解，滤过，照固相萃取柱系统适用性试验项下的方法，自“置于处理好的固相萃取柱上”起，依法操作，得供试品溶液；精密量取对照品溶液、供试品溶液各1ml，混匀，得混合溶液；分别精密吸取对照品溶液与混合溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；（5）采用高效液相色谱法测定单酯型生物碱：色谱条件及系统适用性试验，色谱柱以极性乙醚连接苯基键合硅胶为填充剂；以乙腈‑0.092%磷酸溶液=21：79为流动相，0.092%磷酸溶液含0.04%三乙胺和0.02%二正丁胺；检测波长为232nm；理论板数按苯甲酰新乌头原碱峰计算应不低于6000；取苯甲酰新乌头原碱对照品、苯甲酰乌头原碱对照品、苯甲酰次乌头原碱对照品适量，精密称定，加乙腈制成每1ml分别含50μg、10μg、10μg的混合溶液，作为对照品贮备液，精密量取对照品储备液5ml，置25ml量瓶中，加0.1%磷酸溶液稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液；精密量取对照品贮备液5ml，室温减压回收至干，精密加入0.1mol/L盐酸50ml使溶解，精密量取10ml，加在固相萃取柱上，固相萃取柱以混合型阳离子交换反相吸附剂为填充剂，150mg，容量为6ml，预先依次用乙腈、水各6ml洗脱，依次以水3ml、1.25%氨溶液、水、甲醇、乙腈各5ml洗脱，待洗脱液流尽后，放置5分钟，继用乙腈‑浓氨试液=90：10的混合溶液10ml洗脱，收集洗脱液，于40℃以下减压回收溶剂至干，残渣精密加入乙腈‑0.1%的磷酸溶液=20：80的混合溶液5ml使溶解，滤过，取续滤液作为固相萃取柱系统适用性试验溶液；分别精密吸取上述系统适用性试验溶液与对照品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，计算系统适用性试验溶液与对照品溶液中各相应成分峰面积的比值，不得小于0.95；取检品研细，称取0.2‑2g，置精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入0.1mol/L盐酸溶液25ml，密塞，称定重量，超声处理40分钟并时时振摇，放冷，再称定重量，用0.1mol/L盐酸溶液补足减失的重量，摇匀，转速为每分钟4000转离心30分钟，滤过，精密量取续滤液10ml，照固相萃取柱系统适用性试验项下的方法，自“加在固相萃取柱上”起，依法操作，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得；（6）采用高效液相色谱法测定麻黄生物碱：色谱条件与系统适用性试验，色谱柱以极性乙醚连接苯基键合硅胶为填充剂；以甲醇：0.092%磷酸溶液=1.5：98.5为流动相，0.092%磷酸溶液含0.04%三乙胺和0.02%二正丁胺；检测波长为210nm，理论板数按盐酸麻黄碱峰计算应不低于3000；取盐酸麻黄碱对照品、盐酸伪麻黄碱对照品适量，加流动相制成每1ml各含30µg、15µg的混合溶液作为对照品溶液；取检品，称取0.1‑5g，置蒸馏瓶中，加入氯化钠7.5g，加蒸馏水30ml，再加20%氢氧化钠溶液100ml，混匀，蒸馏，用预先盛0.5mol/L盐酸溶液4ml的100ml量瓶收集蒸馏液近95ml，加水至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10µl，注入液相色谱仪，测定，即得；（7）采用高效液相色谱法测定甘草苷：色谱条件与系统适用性试验，色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈：0.5%冰醋酸溶液=18：82为流动相；检测波长为276nm，理论板数按甘草苷峰计算应不低于4000；取甘草苷对照品适量，精密称定，加70%乙醇制成每1ml含20μg的溶液，即得对照品溶液；取检品，称取0.02‑2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇溶液50ml，称定重量，超声处理30分钟，取出，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10µl，注入液相色谱仪，测定，即得。