一种检测有机磷农药的乙酰胆碱酯酶传感器制备方法

摘要

本发明涉及一种检测有机磷农药的乙酰胆碱酯酶传感器的制备方法，属于生物化工技术领域。本发明的第一步为石墨烯-纳米金复合物修饰工作电极：以石墨烯和纳米金为原料制备的石墨烯-纳米金复合物滴涂到工作电极表面。本发明的第二步乙酰胆碱酯酶传感器的制备：制备的煅烧类水滑石与乙酰胆碱酯酶混合的混合物滴涂到石墨烯-纳米金复合物修饰的工作电极表面。石墨烯-纳米金复合物可以促进电子转移，提高传感器的灵敏度；煅烧类水滑石拥有良好的生物相容性，具有较强的吸附性，可以作为乙酰胆碱酯酶的固定载体，使酶更加稳定的固定在工作电极上，制备的乙酰胆碱酯酶传感器检测时间短，灵敏度高，稳定性好，可以用于实际样品的检测。

主权项

一种检测有机磷农药的乙酰胆碱酯酶传感器的制备方法，其特征在于：制备石墨烯‑ 纳米金复合物，滴涂在玻碳电极表面，然后滴涂煅烧类水滑石‑乙酰胆碱酯酶混合物到石墨烯‑纳米金复合物修饰的工作电极表面，制备检测有机磷农药的乙酰胆碱酯酶生物传感器；        所述乙酰胆碱酯酶传感器的具体制备步骤如下：（1）将2.0 mg石墨烯加入到105 μL 0.01M HAuCl₄·4H₂O中，通过超声处理直到石墨烯分散均匀，然后将105 μL 0.01M的柠檬酸钠、10.0 mL乙醇和20.0 mL去离子水依次添加到上面的悬浮液中，将新鲜配制的125 μL 0.05M硼氢化钠溶液添加到上述混合物中，搅拌直到溶液颜色不再变化，然后再连续搅拌10 h，以16000 r/min的离心速度来使悬浮液分离，然后用去离子水洗涤几次，沉淀物在5 mL的pH值为7.5的磷酸盐缓冲溶液中再次分散，然后在4℃下存储在棕色瓶中；（2）将含有1.208 g的Cu(NO₃)₂·3H₂O、3.846 g的Mg(NO₃)₂·6H₂O和3.751g的Al(NO₃)₃·9H₂O的20 mL溶液在剧烈搅拌的条件下滴定到20 mL含有2.40 g NaOH和5.30 gNaHCO₃的混合溶液中，产生的悬浮液在65℃下，搅拌1 h，得到的产物过滤并用去离子水清洗，直到溶液的pH为中性，然后在60℃下干燥两天，得到的产物为类水滑石，将制备好的类水滑石在马弗炉中500℃加热7 h，得到煅烧类水滑石，制备煅烧类水滑石‑乙酰胆碱酯酶混合液，将煅烧类水滑石分散在去离子水中，搅拌一晚上制备煅烧类水滑石的悬浮液；（3）将乙酰胆碱酯酶溶液与类水滑石悬浮液以1:1的体积比混合，得到煅烧类水滑石‑乙酰胆碱酯酶混合液，将制备好的混合液储存在4℃的冰箱中，将5 μL的石墨烯‑纳米金溶液滴涂在预先处理的玻碳电极上，在空气中干燥2 h，得到的石墨烯‑纳米金玻碳电极用超纯水冲洗表面，将未固定在电极表面的复合物冲洗掉，然后滴涂5.0μL、100 mU的类水滑石‑乙酰胆碱酯酶溶液的混合液，并在室温下干燥2 h，用pH为7.5的磷酸盐缓冲溶液冲洗去除未吸附上的酶，获得检测有机磷农药的乙酰胆碱酯酶生物传感器。