一种利用浮萍发酵生产丁二酸的方法

摘要

一种利用浮萍发酵生产丁二酸的方法。包含以下步骤：将浮萍烘干，粉碎后加水调浆，利用α-淀粉酶和糖化酶水解浮萍所含的淀粉释放出可发酵性糖类作为碳源，添加一定量蛋白酶水解浮萍所含蛋白质，可作为氮源，并添加所需营养物质及pH调节剂，灭菌后即可作为发酵培养基，在无菌的条件下加入培养好的产琥珀酸放线杆菌种子，放入厌氧培养箱进行培养发酵得到丁二酸。本发明开发了一种新型能源植物浮萍来生产丁二酸的方法，不仅解决了浮萍在污水净化过程中因大量繁殖而可能导致的二次污染，而且也为丁二酸的生物炼制提供了廉价的可再生的原料来源，对环境友好，可缓解化学合成丁二酸的石化资源紧张问题。

主权项

一种利用浮萍发酵生产丁二酸的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：1)浮萍原料的粉碎与调浆：将于70℃烘干至恒重的浮萍进行粉碎过60目筛，加水调节总糖浓度至30‑70g/L，得到浮萍醪液；2)发酵培养及制备：调节浮萍醪液的pH值为5.5，加入中温α‑淀粉酶，85℃水解30min，降温调节pH值为4.5，加入糖化酶60℃水解2h，加入所需氮源、无机盐、pH缓冲剂，115℃灭菌20min备用；3)种子液的制备：将平板上的产琥珀酸放线杆菌(Actinobacillus succinogenes)接入种子培养基中，在厌氧培养箱中培养16‑20h，再按照5％(V/V)接种量进行二级扩繁培养8h，即得到液态种子，所述的种子培养基的成分及其浓度为：葡萄糖8g/L，酵母粉12g/L，玉米浆4g/L，NaHCO₃4g/L，NaH₂PO₄9.6g/L，K₂HPO₄1.55g/L；4)接种和发酵：按5‑10％(V:V)的接种量将液态种子接种到发酵培养基中，同时加入0.22μm滤膜过滤的中性蛋白酶0.5g/L，在充满N₂或CO₂的环境中发酵，利用pH缓冲剂调节发酵pH维持在5.5‑7.0，并在30‑38℃发酵30‑60h，最后通过高效液相色谱检测丁二酸含量，所述发酵培养基为：浮萍淀粉水解液总糖30‑70g/L，氮源0‑20g/L，KH₂PO₄2g/L，CaCl₂0.3g/L，MgCl₂0.3g/L，pH缓冲剂是20‑60g/L。