Métodos y composiciones para la escisión y recombinación dirigidas

摘要

Un método para escindir cromatina celular en una región de interés, comprendiendo el método: (a) seleccionar la región de interés; (b) manipular un primer dominio de unión de dedos de cinc para unirse a una primera secuencia de nucleótidos en la región de interés; (c) proporcionar un segundo dominio de unión de dedos de cinc que se une a una segunda secuencia de nucleótidos en la región de interés, en el que la segunda secuencia se localiza entre 2 y 50 nucleótidos de la primera secuencia; (d) expresar una primera proteína de fusión en la célula, comprendiendo la primera proteína de fusión el primer dominio de unión de dedos de cinc y un primer medio dominio de escisión; y (e) expresar una segunda proteína de fusión en la célula, comprendiendo la segunda proteína de fusión el segundo dominio de unión de dedos de cinc y un segundo medio dominio de escisión; en el que (i) la primera proteína de fusión se une a la primera secuencia de nucleótidos, (ii) la segunda proteína de fusión se une a la segunda secuencia de nucleótidos, (iii) dicha unión de la primera y segunda proteínas de fusión posiciona los medios dominios de escisión de forma que la cromatina celular se escinda en la región de interés, y iv) en al menos una de la primera o segunda proteínas de fusión, el medio dominio de escisión está más próximo al extremo N y el dominio de unión de dedos de cinc está más próximo al extremo C.