一种木薯脱毒苗快速扩繁方法

摘要

本发明涉及一种木薯脱毒苗快速扩繁方法，包括以下步骤：1、外植体采集和脱毒预处理；2、外植体表面消毒和茎尖剥取；3、茎尖一步诱导成苗培养；4、茎尖小苗的继代增殖培养；5、半定量RT-PCR法进行病毒检测；6、脱毒试管苗驯化移栽。该技术可以有效的去除木薯茎秆为营养繁殖体携带的各种病毒和病菌，培养出脱毒木薯苗，实现木薯苗的健康栽培和提纯复壮，其扩繁占用空间小，繁殖速度快，移栽成活率高，有效解决木薯健康种苗供应和不同国家地区间种质安全交流，减少病害发生和蔓延，为木薯可持续发展提供技术保障。

主权项

一种木薯脱毒苗快速扩繁方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)、外植体采集和预处理：用刀片切取2～3cm的木薯嫩芽作为外植体，剪去较大的嫩叶，冲洗干净后，除去外植体表面水分；将外植体置于恒温箱中，热处理完成外植体脱毒预处理；(2)、外植体表面消毒和茎尖剥取：在超净工作台上，将外植体消毒处理后，逐层剥去嫩芽上覆盖的幼叶，直至露出顶端分生组织，切取分生组织区域长度为0.3～0.6mm带1～2个叶原基的茎尖；(3)、茎尖诱导培养：采用滤纸液体培养的方式，接种茎尖至诱导培养基中培养，获得无菌小苗；(4)、继代增殖生根培养：将外植体长出的小苗，切取叶片和一部分茎段作为病毒检测的样品；将剩余带芽茎段和顶芽接种在继代培养基中培养生根，获得完整的带根小苗；(5)、病毒检测：提取叶片总RNA，反转录为cDNA，设计引物，以Actin为内参，采用半定量RT‑PCR进行检测；将脱毒不完全的试管苗剔除，无毒的试管苗转入继代培养基中继续增殖培养，即得木薯脱毒组培苗。