一种基于γ-Fe₂O₃@Au复合纳米探针的NMR食源性致病菌快速检测方法

摘要

一种基于γ-Fe₂O₃@Au复合纳米探针的NMR食源性致病菌快速检测方法，属于食品安全致病菌快速检测技术领域。本发明依赖于建立的可以用于食品液体样本中致病菌的核磁共振检测方法，利用γ-Fe₂O₃@Au复合纳米材料制备免疫磁珠针对性地富集目标菌株，利用γ-Fe₂O₃@Au的顺磁和超顺磁特性对核磁共振衰减信号的弛豫时间的影响，检测出样本中是否含有目标致病菌。不同的具体的对应关系为：顺磁免疫磁珠，在一定条件下显示出线性关系，即免疫磁珠含量大，样品的T2/T1值越小，在一定范围能够定量检测目标菌。该方法可以用于食品样本中有害致病菌的快速检测，从而可以作为大批待检样品的快速筛选。

主权项

一种基于γ‑Fe₂O₃@Au复合纳米粒子的食源性致病菌检测方法，其步骤如下：1）将食源性致病菌单克隆抗体固定于γ‑Fe₂O₃@Au复合纳米粒子上获得特异性免疫磁珠；2）将食源性致病菌单克隆抗体在酶标板上固定；3）采用免疫磁珠富集食源性致病菌，并分离；将第1步制得的免疫磁珠加入待检样品，充分混合震荡，抓取食源性致病菌后通过施加外加磁场，免疫磁珠就汇集到磁场一边，吸走上清液分离出免疫磁珠，若待检样品中有食源性致病菌，则食源性致病菌被免疫磁珠所富集，加少量无菌的去离子水则形成食源性致病菌的免疫磁珠悬浊液；4）将所述免疫磁珠悬浊液加到第2步固定了单克隆抗体的酶标板上，若存在食源性致病菌则形成双抗夹心，用无菌的去离子水清洗，则没有抓取到食源性致病菌的免疫磁珠就被洗掉，若不存在食源性致病菌，则所有免疫磁珠都被洗掉；5）之后，用洗脱剂将酶标板上的双抗夹心的免疫磁珠洗下来，通过外加磁场分离免疫磁珠，用无菌的去离子水清洗掉离子和溶剂，如果还存在免疫磁珠就是抓到食源性致病菌的免疫磁珠；6）将第5）步所得的免疫磁珠，加入无菌的去离子水形成免疫磁珠的悬浊液，进行核磁共振的弛豫时间测定；在固定场强下，无菌的去离子水的T1/T2是一个恒定值，以无菌的去离子水为空白，相比无菌的去离子水，测得的悬浊液的弛豫时间T1/T2若有显著降低，则说明含有免疫磁珠，从而间接证明样品中有食源性致病菌，免疫磁珠的量与T1/T2的下降呈正比，通过加标定量磁珠而间接定量出食源性致病菌的量；所述T1为自旋‑晶格弛豫时间，所述T2为自旋‑自旋弛豫时间；所述γ‑Fe₂O₃@Au复合纳米粒子是以金为壳层的磁性核壳复合纳米粒子，γ晶形的纳米粒径小于1000纳米；所述自旋‑晶格弛豫时间采用180˚‑τ‑90˚脉冲方法测定，自旋‑自旋弛豫时间采用CPMG序列方法测定。