发明名称 | 翘嘴红鲌精原干细胞分离培养方法 | ||
摘要 | 本发明涉及一种翘嘴红鲌精原干细胞分离培养方法,包括以下步骤,(1)精巢组织的收集:无菌条件下收集7月龄翘嘴红鲌精巢,用含有双抗的PBS中漂洗后碾压使精巢组织分散;(2)精原干细胞的消化、分离:向分散的精巢组织中添加0.1%IV型胶原酶,消化液离心得到沉淀;沉淀用0.25%胰蛋白酶消化;用含有10%FBS的培养基终止消化,收集细胞;(3)精原干细胞的原代培养:用含细胞因子的DMEM/F12完全培养基重悬步骤(2)所得的细胞,调整细胞浓度后铺于明胶包被的24孔细胞培养板中,26℃培养。本发明使得翘嘴红鲌精原干细胞原代细胞体外生长更容易增殖,为翘嘴红鲌生殖发育研究提供有效的细胞平台。 | ||
申请公布号 | CN104830756A | 申请公布日期 | 2015.08.12 |
申请号 | CN201510228179.0 | 申请日期 | 2015.05.07 |
申请人 | 湖州师范学院 | 发明人 | 刘莉;曹访;采克俊 |
分类号 | C12N5/076(2010.01)I | 主分类号 | C12N5/076(2010.01)I |
代理机构 | 北京众合诚成知识产权代理有限公司 11246 | 代理人 | 袁彩君 |
主权项 | 一种翘嘴红鲌精原干细胞分离培养方法,其特征在于:包括以下步骤,(1)精巢组织的收集:无菌条件下收集7月龄翘嘴红鲌精巢,用含有双抗的PBS中漂洗,剥离附属组织;然后碾压剩余的精巢组织使精巢组织分散;(2)精原干细胞的消化、分离:向分散的精巢组织中添加0.1%IV型胶原酶,25℃~30℃消化1h~2h之后,收集消化液;消化液离心分离后弃上清,得到沉淀;沉淀用5~15倍体积的0.25%胰蛋白酶消化10min~20min,200目滤网过滤;滤液用含有10%FBS的培养基终止胰蛋白酶消化作用;之后滤液离心分离,弃上清,收集沉淀后的细胞;(3)精原干细胞的原代培养:用DMEM/F12完全培养基重悬步骤(2)所得的细胞,调整细胞浓度为1×10<sup>6</sup>个/mL~5×10<sup>6</sup>个/mL,按照1mL/孔的量铺于明胶包被的24孔细胞培养板中,26℃培养,2h后加新鲜培养基1mL,以后每2.5d换液一次,3~4d可见呈葡萄串状的精原干细胞。 | ||
地址 | 313000 浙江省湖州市吴兴区二环东路759号 |