一种樱桃苗超低温脱毒处理方法

摘要

本发明公开了一种樱桃苗超低温脱毒处理方法，包括步骤如下1)取苗采取压枝的方法来取得樱桃苗，2)切下取得樱桃苗单芽长约1mm的茎尖，3)红芽芋茎尖在附加固体培养基上预培养3d，组培苗于温度26～42℃、光强1000-2000lx条件下培养30～35天；4)预培养、装载，5)玻璃化，6)冷冻，7)冷冻后进行解冻，然后进行恢复处理1-2次，然后进行诱导成苗，8)诱导成苗：9)病毒检测本发明克服了现有技术的不足，玻璃化法超低温保存可脱除樱桃苗病毒，脱毒率为90.6％。而常规的茎尖培养，脱毒率仅为63.5％。不仅脱毒率高，而且茎尖取材大、操作简单方便。

主权项

一种樱桃苗超低温脱毒处理方法，其特征在于：包括步骤如下：1)取苗采取压枝的方法来取得樱桃苗；2)切下取得樱桃苗单芽长约1mm的茎尖；3)红芽芋茎尖在附加固体培养基上预培养3d，组培苗于温度26～42℃、光强1000‑2000lx条件下培养30～35天；4)预培养、装载：将步骤3)热处理后的组培苗在超净工作台剥取1～2mm的茎尖组织，将茎尖组织预培养3～5天，然后经室温装载20～30min；5)玻璃化：装载后的茎尖组织转至冷冻保护溶液PVS2中冰浴处理60～90min，6)冷冻：玻璃化处理后的茎尖组织分装至冻存管中，将冷冻管迅速投入液氮中冷冻20～24h；7)冷冻后进行解冻，然后进行恢复处理1‑2次，然后进行诱导成苗；8)诱导成苗：恢复处理后的茎尖组织转至MS增苗培养基中先暗培养3～7天，再转入光照培养，成苗后继代培养，9)病毒检测：采用RT‑PCR检测待测苗，筛选出脱毒苗，对含有该病毒的植株，拨取茎尖做初代培养，继代扩繁4次以后，拨取1mm左右的茎尖，利用玻璃化超低温液氮处理技术对SMYEV进行脱除，在病毒脱除过程中，装载处理为20℃，1h；玻璃化处理为0℃，2h；液氮处理1h后，进行45℃水浴2min。