扁穗牛鞭草ISAP指纹图谱的建立方法及其应用

摘要

本发明公开了一种扁穗牛鞭草ISAP指纹图谱的建立方法及其应用。本发明利用ISAP分子标记技术来构建不同扁穗牛鞭草种质的DNA指纹图谱，有利于对无性系扁穗牛鞭草进行快速、准确的鉴定，与常规的形态检验与生化检验相比，不受生长环境和季节的影响，结果更可靠，省时省力；本发明具有操作简单、直观实用等特点，可以促进ISAP分子标记技术在准确、快速、简便的品种鉴定中更广泛地应用，同时应用该方法，对扁穗牛鞭草无性系种质的遗传变异进行鉴定，从而实现对扁穗牛鞭草无性系种质变异的早期筛选及新品种选育的需要。

主权项

扁穗牛鞭草ISAP指纹图谱的建立方法，其特征在于，包括如下步骤：a.DNA提取：采用CTAB法提取扁穗牛鞭草基因组DNA；b.ISAP引物序列的PCR扩增：在Bio‑Rad icycler PCR仪上进行PCR扩增，使用序列为序列1‑30的15对引物进行多态性筛选；c.ISAP‑PCR产物的电泳检测：用6％的非变性聚丙烯酰胺凝胶在电泳仪上电泳，银染法后拍照，得照片；d.数据统计及分析：在相同迁移位置，人工记录每个引物的扩增片段，有带记为1，无带记为0，形成原始“0，1”二元数据矩阵；e.DNA指纹图谱的构建：根据照片上引物扩增情况，挑取具有代表性的ISAP多态性带，绘制扁穗牛鞭草的DNA指纹图谱。