一种高效表达高分子量型腈水合酶的基因工程菌及其应用

摘要

本发明公开了一种高效表达高分子量型腈水合酶的基因工程菌及其应用，属于微生物基因工程技术领域。本发明所述的高分子量型腈水合酶基因nhhB(rbs)A(rbs)G是基于R.rhodochrous J1来源的腈水合酶基因bag，经密码子优化及表达元件改造之后化学合成得到，该基因全长1645bp，编码533个氨基酸，能够在大肠杆菌中成功表达。该方法高效安全，在24℃诱导16h即可获得96.7U/mL可溶性腈水合酶，纯化后比酶活高达234U/mg。该方法有利于生产过程中腈水合酶的提取纯化以及酰胺类物质的高效酶法合成。

主权项

一种高产高分子量型腈水合酶的重组大肠杆菌，其特征在于，所述重组大肠杆菌以E.coli BL21(DE3)为宿主，pET24a(+)为载体，表达腈水合酶；所述腈水合酶由氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3所示的nhhB基因、nhhA基因、调控基因nhhG组成；所述nhhB与nhhA基因、nhhA与nhhG基因均由核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的SD序列和核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示的间隔序列按照“SD序列‑间隔序列”的方式相连。