一种辣椒花药直接获得植株的培养方法和培养基

摘要

本发明一种辣椒花药直接获得植株的培养方法及培养基，属于植物细胞工程技术领域。所述培养方法包括：(1)、选取小孢子处于单核靠边期的花蕾；(2)、花蕾用70％酒精浸泡0.5～1分钟，12‰的氯化汞8～15分钟，无菌水冲洗3～5次，无菌滤纸吸干水分，得到单核靠边期的无菌花药；(3)、将单核靠边期的无菌花药漂浮于液体培养基中，黑暗震荡培养20～25天后转为光照震荡培养；(4)、光照震荡培养10～20天后，将形成的子叶型胚转至MSO固体培养基中培养，长成正常植株。本发明的培养方法具有以下优点：(1)、大大提高正常胚状体的诱导频率，显著提高正常植株的再生频率；(2)、操作过程简单，能够直接由自由散落于液体培养基的小孢子获得植株；(3)、适用于牛角椒、羊角椒、线椒、灯笼椒等多种类型的辣椒。

主权项

一种辣椒花药直接获得植株的培养方法，包括下述步骤：(1)、将单核靠边期的无菌花药漂浮于液体培养基中，黑暗震荡培养，20～25天后转为光照震荡培养；所述黑暗震荡培养和光照震荡培养时的摇床转速为40转/分；黑暗震荡培养和光照震荡培养中，每隔7～10天补足液体培养基至初始量；所述液体培养基的组成为：2500mg/L KNO₃、1025mg/L NH₄NO₃、295mg/L CaCl₂·2H₂O、325mg/L MgSO₄·7H₂O、145mg/L KH₂PO₄、67mg/L(NH₄)₂SO₄、75mg/L NaH₂PO₄·H₂O、100mg/L Ca(NO₃)₂·4H₂O、13mg/L KCl、13.9mg/LFeSO₄·7H₂O、18.65mg/L Na₂·EDTA、0.695mg/L KI、3.15mg/L H₃BO₃、22.13mg/L MnSO₄·H₂O、3.625mg/L ZnSO₄·7H₂O、0.188mg/LNa₂MoO₄·2H₂O、0.016mg/L CuSO₄·5H₂O、0.016mg/L CoCl₂·6H₂O、100mg/L肌醇、5mg/L烟酸、2mg/L甘氨酸、0.5mg/L盐酸硫氨素(维生素B1)、0.5mg/L盐酸吡哆醇(维生素B6)、0.5mg/L叶酸、0.05mg/L生物素、800mg/L谷氨酰胺、100mg/L丝氨酸、30mg/L谷胱甘肽(GSH)、0.1mg/L BA、0.1mg/L IAA、0.01mg/L NAA、0.1％活性炭和6％蔗糖；(2)、光照震荡培养10～20天后，将形成的子叶型胚转至MSO固体培养基中培养，长成正常植株。