一种固定化3-苯氧基苯甲酸降解酶及其制备方法

摘要

本发明公开了一种固定化3-苯氧基苯甲酸降解酶的制备方法，属于固定化酶领域。包括如下步骤：（1）将鞘氨醇单胞菌（Sphingomonas sp.）SC-1发酵液离心，收集菌体，菌体与Tris-HCl缓冲液混匀后冰水浴超声破碎，离心去除胞内酶，细胞碎片沉淀用Tris-HCl缓冲液加至破碎前体积制成酶液；（2）将此酶液与海藻酸钠溶液按一定比例均匀混合，均匀滴落于氯化钙溶液中进行包埋固定化。本发明制备的固定化3-苯氧基苯甲酸降解酶，在宽温度(4℃-40℃)和宽pH(5.0-9.0)具有较高的酶活，且具有较强的连续反应性能，制备方法简单，生产成本低。

主权项

一种固定化3‑苯氧基苯甲酸降解酶的制备方法，具体制备步骤如下：(1)鞘氨醇单胞菌SC‑1发酵液离心，收集菌体，菌体混匀于缓冲液后破碎，离心除去胞内酶液，得沉淀A；用缓冲液重复2次清洗沉淀A，离心除去上清，得细胞碎片为沉淀B，再用缓冲液重悬沉淀B，制成3‑苯氧基苯甲酸降解酶液；(2)将此酶液按一定比例混匀于海藻酸钠溶液中，用注射器针头将其滴入CaCl₂溶液中，4℃低温下固定化成海藻酸钙凝珠，经缓冲液清洗3次除去表面残留酶液后，制成固定化3‑苯氧基苯甲酸降解酶凝珠；其中所述的缓冲液为0.02mol/L，pH值为7.0的Tris‑HCl缓冲溶液；其中所述菌体混匀于缓冲液的步骤，菌体质量与缓冲液体积比例为1:2~1:16（m/v）；所述破碎的条件为冰水浴中破碎，超声破碎功率为40kHz、45w~450w，工作1s、间歇3s，超声时间1200s；所述海藻酸钠溶液浓度为0.5%~3%（m/v）；所述酶液与海藻酸钠溶液混匀的比例为1:3~1:7（v/v）；所述注射器针头大小为8号~16号针头；所述CaCl₂ 溶液浓度为0.25%~12%（m/v）；所述4℃低温下固定化的时间为0.5h~24h。