一种幽门螺杆菌IgG抗体ELISA半定量检测试剂盒及其应用

摘要

本发明提供了一种幽门螺杆菌IgG抗体ELISA半定量检测试剂盒 ，该试剂盒由幽门螺杆菌抗原包被酶标反应板、标本稀释液、洗涤液、酶标二抗、底物液、终止液、阳性对照液、阴性对照液及标准液构成。利用该试剂盒建立了快速敏感的ELISA半定量检测血清中幽门螺杆菌特异性IgG抗体的方法。 本发明制备出幽门螺杆菌IgG抗体标准液，在此基础上将幽门螺杆菌抗原包被酶标反应板，采用间接ELISA法，检测血清中特异性幽门螺杆菌IgG抗体，并且通过酶免疫单位（EIU）的计算对其进行定量。本发明，具有高特异性和敏感性，本试剂盒主要供实验室研究和临床辅助诊断使用。

主权项

一种幽门螺杆菌IgG抗体ELISA半定量检测试剂盒，其特征在于：由幽门螺杆菌抗原包被酶标反应板、标本稀释液、洗涤液、酶标二抗、底物液、终止液、阳性对照液、阴性对照液及标准液构成，所述的幽门螺杆抗原包被酶标反应板通过下列步骤制备而成：(1)取96孔酶标板一块；(2)将幽门螺杆菌抗原用包被液按1：1000的倍数进行稀释，将稀释好的抗原液于每个酶标板孔中加入110μl，把酶标板置入湿盒内，在2‑8℃包被过夜(3)用洗涤液清洗：用洗涤液清洗包被过夜的酶标板，每孔加入350ul洗涤液，清洗2‑4次；(4)添加稳定缓冲液：每孔加入150ul稳定缓冲液，在18‑25℃条件下孵育2‑4小时，然后抽干；(5)取抽干的抗原包被板加200μl PBS稀释的10％牛血清蛋白在37℃封闭1‑2小时，得到抗原包被酶标反应板；(6)包装：用铝箔袋包装，并在袋中放入干燥剂，包装后储存在2‑8℃的冷库中；所述的包被液：0.05mol/L碳酸盐缓冲液(pH9.6)0.75g碳酸钠,1.46g碳酸氢钠,加去离子水定容至500ml；所述的标本稀释液：10％牛血清蛋白+0.1％ProClin300+0.01M pH7.4的磷酸盐缓冲液(PBS)；所述的洗涤液：0.05％Tween 20+0.01mol/L pH7.4的磷酸盐缓冲液(PBST)；所述的酶标二抗：辣根过氧化物酶标记的兔抗人IgG多抗；所述的底物液：TMB‑H₂O₂尿素溶液；所述的终止液：2mol/L H₂SO₄溶液；所述的阴性对照液：含人血清基幽门螺旋杆菌IgG阴性对照液；所述的阳性对照液：含人血清基幽门螺旋杆菌IgG阳性对照液；所述的标准液：含人血清基幽门螺旋杆菌IgG标准液。