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抗体修饰与太赫兹波谱联用的转基因蛋白检测方法，包括如下步骤：(1)石英玻片清洗；在石英玻片(A)一面上做标记，先后使用去离子水、洗洁精溶液、去离子水、浓盐酸/甲醇混合溶液、去离子水、浓硫酸和去离子水清洗，并用氮气吹干；(2)石英玻片表面修饰；取3‑氨基丙基‑三甲氧基硅烷溶液置于经过清洗的石英玻片的标记面(D)上，取另一经过清洗且标记面朝下的石英玻片盖上，在湿润环境下修饰后分开石英玻片，之后用甲醇超声清洗石英玻片，氮气吹干后保存；(3)石英玻片表面活化；称取N,N′‑二琥珀酰亚胺基碳酸酯、二甲氨基吡啶，量取三乙基胺及无水二甲基甲酰胺，配置上述物质的混合液；取上述混合液置于经过表面修饰的石英玻片的标记面上，取另一经过表面修饰且标记面朝下的石英玻片盖上，活化后分开石英玻片，之后用甲醇超声清洗并用氮气吹干；(4)抗体固定；取Pluronic F‑127、海藻糖，并用PBS缓冲液溶解，取溶解后的混合溶液与抗体溶液混匀，在经过表面活化的石英玻片的标记面上抗体点样两次，分别是待测点(B)与参比点(C)，保持湿润环境并过夜；(5)石英玻片表面多余位点封闭；配制酪蛋白/PBS混合溶液，充分溶解，在离心管中加入经过抗体固定的石英玻片和上述酪蛋白/PBS混合溶液混匀并静置；之后依次取出石英玻片，用PBS缓冲液清洗石英玻片两次，最后在PBS缓冲液中保存；(6)固定待测转基因蛋白；将待测转基因蛋白溶解在PBS缓冲液中，稀释成不同待测浓度，并将待测 转基因蛋白溶液滴加在已封闭好的石英玻片上的待测点，湿润环境下孵育，之后清洗并用氮气吹干；(7)采集石英玻片上待测点与参比点的太赫兹时域波谱；在太赫兹时域波谱系统的波谱频宽为0.1‑3.5THz区间分别采集同一石英玻片上待测点与参比点的太赫兹时域波谱；(8)比较石英玻片待测点与参比点太赫兹时域波谱；用绘图软件在同一图中逐个画出各个样品上待测点与参比点太赫兹时域波谱图形，若待测点的最高峰峰值小于参比点脉冲峰峰值的X值，表明该石英玻片上待测点上有转基因蛋白；若待测点的最高峰峰值占参比点脉冲峰峰值的X值及以上，表明该石英玻片不含转基因蛋白或转基因蛋白浓度过低无法检测出；所述X值为90％。 |
