Verfahren zum Nachweis der Expression rekombinanter Proteine an einer Zelloberfläche und zur Immobilisierung und Aufreinigung von Zellen und Proteinen

摘要

Verfahren zum Nachweis der Expression eines durch Rekombination erzeugten Zielpolypeptids in einer demgemäß transformierten Wirtszelle, wobei das rekombinante Zielpolypeptid in oder an der die Wirtszelle gegen das sie umgebende äußeren Medium abgrenzenden Zelloberfläche repräsentiert wird und einen von dem äußeren Medium aus zugänglichen Abschnitt aufweist, dadurch gekennzeichnet, a) dass man das rekombinante Zielpolypeptid als Fusionsprotein mit einem für die Expression und Repräsentation des Zielpolypeptids notwendigen Helfer-Polypeptid derart konstruiert, dass es in dem zugänglichen Abschnitt wenigstens einmal die Aminosäure Cystein aufweist, b) dass man die Wirtszelle während oder nach der Expression einem äußeren Medium aussetzt, welches eine Markersubstanz enthält, die spezifisch an Cystein bindet, c) dass man die Bindungreaktion zwischen Cystein und der Markersubstanz herbeiführt, d) dass man die Wirtszelle anschließend einem Prozess zur Detektion der Cystein-Marker-Verbindungen unterwirft, e) und dass die Detektion von Cystein-Marker-Verbindungen als Beweis für die Anwesenheit des rekombinanten Zielpolypetids und somit für dessen Expression angesehen wird.