一种从葱白中提取葱酶的方法

摘要

本发明属于葱白提取物的方法，具本发明葱白中酶的方法操作，浸提30小时，加入Na-K磷酸盐缓冲液和10％甘油，在－40℃的温度下预冻3小时取出，解冻后；在-20℃的温度下冷冻3小时取出，解冻后；在-0℃的温度下冷冻3小时取出，解冻后；在10℃下静置3小时取出，冷却后；在20℃下静置3小时取出，冷却后；在35℃下静置3小时取出，冷却，在4℃条件下，加入15％（m／v）PEG8000，然后在4℃下，以转速为8000r·min－1高速离心20min，弃上清，得蛋白质沉淀物，将沉淀物用PH6.5的Na-K缓冲液溶解，装入预处理好的透析袋中，于4℃条件下透析6h，每2h更换一次透析液，将透析处理过的蛋白质溶液进行冻干处理，本发明简便易行工艺质量稳定。

主权项

一种从葱白中提取葱酶的方法，其特征在于，其包括以下步骤：（1）取新鲜大葱，洗净晾干后，取葱白50g加入250ml浸提液在‑15℃的环境下静置30小时，其中，浸提液由甲醇、三氯甲烷、水三者以60:25：15的比例混合而成；（2）将浸提液与葱白分离，置于分液漏斗中，加入100ml水和100ml三氯甲烷，静置萃取，完全分层后去上层水相，浓缩去除甲醇，浓缩液用纯化水定容至100ml，于4℃保存；（3）将PH为6.5的Na‑K磷酸盐缓冲液＋10％甘油，预冷12h后，加入浓缩液中，同时加入浓度为20umol·L－１的5’－磷酸吡哆醛，得到溶液a；（4）取溶液a，在－40℃的温度下预冻3小时取出，解冻后；在‑20℃的温度下冷冻3小时取出，解冻后；在‑0℃的温度下冷冻3小时取出，解冻后；在10℃下静置3小时取出，冷却后；在在20℃下静置3小时取出，冷却后；在35℃下静置3小时取出，冷却，得到溶液b；（5）在4℃条件下，向溶液b中缓慢加入15％（m／v）PEG8000，持续搅拌30min，然后在4℃下，以转速为8000r·min－1高速离心20min，弃上清，得蛋白质沉淀物；（6）将沉淀物用PH6.5的Na‑K缓冲液溶解，装入预处理好的透析袋中，于4℃条件下透析6h，每2h更换一次透析液，将透析处理过的蛋白质溶液进行冻干处理。