一种用于甄别和评价复杂成分工业废水遗传毒性的方法

摘要

本发明涉及一种用于甄别和评价复杂成分工业废水遗传毒性的方法，是将发芽的蚕豆种子悬浮培养于用自来水梯度稀释的待测废水溶液中，2周后切取根尖，置于蛋白酶K溶液，抽真空。分离根尖细胞核，应用单细胞凝胶电泳（SCGE）技术分离DNA断片。应用荧光显微镜拍摄彗星图片，应用CometScore image-analysis system测定彗星尾长和尾矩，再应用SPASS软件进行统计分析。本发明的检测方法通过抽真空能够促进蛋白酶K渗入根尖分生组织细胞核，加速DNA交联蛋白质的降解，从而解除DNA-蛋白质交联作用对DNA断片的阻滞作用，便于揭示和准确评价待测废水诱导DNA断裂和损伤的真实水平。

主权项

一种用于甄别和评价复杂成分工业废水遗传毒性的方法，其特征在于：步骤包括：(1)蚕豆种子的催芽培养：蚕豆种子用0.1％次氯酸钠溶液消毒，充分清洗后于23‑25℃和75％相对湿度环境下催芽，发芽后转移至石英砂中继续培养；(2)待根尖长至2cm时，悬浮培养于适宜浓度梯度的待监测废水稀释溶液，同时以自来水作为对照，培养条件同步骤(1)；(3)培养2周后剪取1cm根尖；将暴露组和对照组根尖均置于100μg/mL蛋白酶K溶液，室温下抽真空；抽真空条件为：0.09Mpa，3min/次，间歇3min，重复6次；(4)清洗根尖，液氮速冻，解冻后用玻璃棒末端轻轻碾压根尖，用核提取液提取细胞核，50μm尼龙膜过滤，1000×g低温离心8min，收集细胞核；核提取液为50mM Tris‑HCl,10mM Na₂EDTA,100mM NaCl,0.1％TritonX‑100,pH 7.4；(5)单细胞凝胶电泳，溴化乙锭染色，荧光显微镜下观察和拍摄彗星细胞；(6)测定彗星尾长和尾矩；(7)绘制彗星尾长和尾矩的Hormesis剂量效应曲线，结合显著性分析方法，界定废水致毒的浓度范围。