基于环介导等温扩增技术的胡萝卜成分快速检测试剂盒及其检测方法

摘要

本发明公开了一种基于环介导等温扩增技术的胡萝卜成分快速检测试剂盒及其检测方法，属于食品和饮料中植物源性成分的定性检测技术，具体地说是用环介导等温扩增技术检测食品和饮料中胡萝卜成分的试剂盒及方法。试剂盒包括10×Bst buffer、dNTP、硫酸镁、甜菜碱、上游内引物、下游内引物、上游外引物、下游外引物、上游环引物、下游环引物、Bst DNA聚合酶、显色剂和阳性对照；其中10×Bst buffer中含有三羟基甲基氨基甲烷、氯化钾、硫酸铵、硫酸镁和曲拉通X-100；胡萝卜成分的环介导等温扩增检测方法包括食品和饮料DNA的提取、胡萝卜成分的环介导等温扩增和结果判定。本发明的试剂盒快速、特异性强、操作简便、重复性好，方法灵敏度很高，可检测含量低至0.001%的胡萝卜成分。

主权项

一种基于环介导等温扩增技术的胡萝卜成分快速检测试剂盒，其特征在于，其中的试剂包括（1）‑（4）：（1）环介导等温扩增反应液A包括10×Bst buffer反应缓冲液、1‑2mmol/L dNTP、5‑7mmol/L硫酸镁、0.8‑1µmol/L上游内引物、0.8‑1µmol/L下游内引物、0.1‑0.2µmol/L上游外引物、0.1‑0.2µmol/L下游外引物、0.4‑0.6µmol/L上游环引物、0.4‑0.6µmol/L下游环引物和0.7‑0.9mol/L甜菜碱；其中10×Bst buffer反应缓冲液含有200mmol/L pH8.8的三羟基甲基氨基甲烷‑盐酸、100mmol/L氯化钾、100mmol/L硫酸铵、20mmol/L硫酸镁和1％曲拉通X‑100；其中上游内引物的序列为：5'‑AACCACCGATGTCGCGATGCCTTTTGTGTGCGGTTGGC‑3'；下游内引物的序列为：5'‑ GTCGTTGTGTATACCCGCCGCGGGTCACAATCGAAGTGCA‑3'；上游外引物的序列为：5'‑ GAAATTGGCCTCCCGTGC‑3'；下游外引物的序列为：5'‑ GCTTAAACTCAGCGGGTAGT‑3'；上游环引物的序列为：5'‑CGTCACCAGAGACTCATTTTTGA‑3'；下游环引物的序列为：5'‑GGCCCTTGGGCACAGCAAA‑3'；其中上游内引物、下游内引物、上游外引物、下游外引物、上游环引物、下游环引物体积比为：8:8:1:1:4:4；（2）Bst DNA聚合酶B：8U/µL；（3）显色剂C：荧光染料SYBR Green；（4）阳性对照D：胡萝卜基因组DNA，20ng/µL。