一种人血管eNOS基因启动子改构体及其制备方法和应用

摘要

本发明公开了一种人血管eNOS基因启动子改构体及其制备方法和应用。本发明所述人血管eNOS基因启动子改构体的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明通过对人血管eNOS基因启动子进行改造，从根本上改变了eNOS基因固有的弱启动子特性，提高了eNOS基因启动子的基础转录活性和刺激转录活性，为阐明其功能和调控机制建立了有用的工具，在基因治疗领域具有潜在的应用前景。

主权项

一种人血管eNOS基因启动子改构体的制备方法，其特征在于包括如下步骤：（1）根据eNOS基因启动子序列设计一对5’端相连方向相反的引物，所述eNOS基因启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，所述引物序列如SEQ ID NO:3~4所示；（2）通过PCR进行eNOS基因启动子的插入序列突变，所述PCR的反应体系如下：模板1ng/μL                  5μLdNTPs各2.5mmol/L            2μL引物各20 μmol/L             1μL10×缓冲液                    2.5μL聚合酶5U/μL                 0.1μL灭菌三蒸水                    13.5μL；所述PCR的反应程序为：95℃ 5min， 94℃ 45s，55℃ 45s，72℃ 5min，30个循环，72℃ 10min，4℃ 24h；    经过上述步骤，得到人血管eNOS基因启动子改构体。