一种利用胶冻样芽胞杆菌共存保存枯草芽胞杆菌的方法

摘要

本发明涉及一种利用胶冻样芽胞杆菌共存保存枯草芽胞杆菌的方法。该方法包括如下步骤：(1)制备枯草芽孢杆菌菌液；(2)制备胶冻样芽胞杆菌菌液；(3)将步骤(1)制得的枯草芽孢杆菌菌液与步骤(2)制得的胶冻样芽胞杆菌菌液混合均匀，制得胶冻样芽胞杆菌与枯草芽胞杆菌混合菌剂。本发明首次通过利用胶冻样芽胞杆菌与枯草芽胞杆菌共存的方式保存枯草芽胞杆菌，利用胶冻样芽孢杆菌分泌的胞外多糖，降低发酵液中的水活度，减少枯草芽胞杆菌芽胞的萌发率，极大提高了枯草芽胞杆菌液体菌剂的保存期及活性。

主权项

一种利用胶冻样芽胞杆菌共存保存枯草芽胞杆菌的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将枯草芽孢杆菌经活化后，接入种子液体培养基I中，经种子培养后，接种于发酵培养基I中，在温度33～37℃、通气量1.33～1.88vvm的条件下发酵培养26～36h，制得孢子浓度为20～50亿/ml的枯草芽孢杆菌菌液；所述的发酵培养基I组分如下：玉米粉40～60g/L，豆粕粉30～40g/L，硫酸镁10～15g/L，葡萄糖8～10g/L，K₂HPO₄1～1.5g/L，pH7.0～7.5；(2)将胶冻样芽胞杆菌经活化后，接入种子液体培养基II中，经种子培养后，接种于发酵培养基II中，在温度30～33℃、通气量1.60～2.00vvm、转速160～180rpm的条件下发酵培养12～14h；然后在通气量2.2～2.7vvm、转速180～220rpm的条件下，继续发酵培养12～14h，制得菌体浓度为10～20亿/ml的胶冻样芽胞杆菌菌液；所述的发酵培养基II组分如下：蔗糖或葡萄糖15～20g/L，K₂HPO₄0.2～0.5g/L，MgSO₄0.2～0.4g/L，NaCl 0.2～0.4g/L，(NH₄)₂SO₄1.0～3.0g/L，CaCO₃3.0～5.0g/L，酵母粉1.0～2.0g/L，pH7.0～8.0；(3)将步骤(1)制得的枯草芽孢杆菌菌液与步骤(2)制得的胶冻样芽胞杆菌菌液混合均匀，枯草芽孢杆菌菌液占总体积的体积百分比为40～60％，胶冻样芽胞杆菌菌液占总体积的体积百分比为40～60％，制得胶冻样芽胞杆菌与枯草芽胞杆菌混合菌剂。