一种测定溶菌酶的适配体纳米金共振瑞利散射光谱方法

摘要

本发明公开了一种测定溶菌酶的适配体纳米金共振瑞利散射光谱法，包括如下步骤：（1）制备溶菌酶纳米金适配体探针；（2）制备溶菌酶标准溶液体系；（3）制备空白对照溶液体系：用步骤（2）的方法不加溶菌酶标准液制备空白对照溶液；（4）分别以溶菌酶标准溶液体系及空白对照溶液体系测定共振瑞利散射峰强度值I与I₀，计算ΔI=I-I₀；（5）以ΔI对溶菌酶的浓度关系做工作曲线；（6）被测物样品测定，算出被测物的ΔI_样＝I_样-I₀；（7）根据样品测得的ΔI_样，查步骤（5）的工作曲线，计算出被测物中溶菌酶的浓度。本测定方法的仪器简单，操作快速，灵敏度高、选择性好。

主权项

一种测定溶菌酶的适配体纳米金共振瑞利散射光谱法，包括如下步骤：（1）制备溶菌酶纳米金适配体探针：取序列为5′‑ CAGTGTATCGAATTCATCAGGGCTAAAGAGTGCAGAGTTACT‑3′的溶菌酶适配体，先用二次蒸馏水溶解至浓度为1 μmol/L，再加入2.0 mL 47.8 μg/mL纳米金溶液，0.8 mL 1 μmol/L 溶菌酶适配体，混合均匀，室温下静置10min，即获得0.28 μmol/L溶菌酶适配体探针，于4℃保存；（2）制备溶菌酶标准溶液体系：取刻度试管，依次移取280μL 0.28 μmol/L溶菌酶适配体探针，50μL 0.05 mol/L pH 8.05 Tris‑HCl缓冲溶液，5～60μL 0.174 μmol/L溶菌酶标准溶液，用二次蒸馏水定容至1.0mL，再加入20～90μL 2.0 mol/L NaCl溶液，用二次蒸馏水定容至2.0mL；混匀；（3）制备空白对照溶液体系：用步骤（2）的方法不加溶菌酶标准液制备空白对照溶液；（4）分别取按步骤（2）、(3）制备的溶菌酶标准溶液体系及空白对照溶液体系适量，置于比色皿中，在荧光分光光度计上，同步扫描激发波长和发射波长，获得体系的共振瑞利散射光谱，测定体系最大波长368 nm处溶菌酶标准溶液体系的共振瑞利散射峰强度值I，以及测定空白对照溶液体系的共振瑞利散射峰强度值I₀，计算ΔI = I‑I₀；（5）以ΔI对溶菌酶的浓度关系做工作曲线；（6）被测物样品测定：取含有溶菌酶的被测物，然后移取一定量替换溶菌酶标准溶液，按步骤（2）～（4）操作；算出被测物的ΔI_样＝I_样‑I₀；（7）根据样品测得的ΔI_样，查步骤（5）的工作曲线，计算出被测物中溶菌酶的浓度。