突变葡糖脱氢酶

摘要

对葡萄糖的底物特异性提高的突变葡糖脱氢酶，其是包含下述氨基酸序列并且具有葡糖脱氢酶活性的蛋白质，所述氨基酸序列是SEQ IDNO：3所示的氨基酸序列或者是在SEQ ID NO：3所示氨基酸序列的第365位以外具有1个或多个氨基酸残基的取代、缺失、插入或添加的氨基酸序列，对应于所述第365位氨基酸残基被取代成其他氨基酸残基。

主权项

由如下氨基酸序列组成并具有葡糖脱氢酶活性的突变葡糖脱氢酶，所述氨基酸序列是SEQ ID NO：3所示氨基酸序列或包括将对应于选自第326、472、475和529位之中的至少一个位置上的一个或多个氨基酸残基用其他氨基酸残基取代的SEQ ID NO：3所示氨基酸序列，其中对应于所述氨基酸序列的第365位上的氨基酸残基被替换成另一个氨基酸残基，其中对应于第472位上的氨基酸残基被替换成选自天冬氨酸、谷氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、异亮氨酸、天冬酰胺和组氨酸残基的氨基酸残基，对应于第326位上的氨基酸残基被替换成谷氨酰胺或缬氨酸残基，对应于第475位上的氨基酸残基被替换成组氨酸或丝氨酸残基，以及对应于第529位上的氨基酸残基被替换成酪氨酸，组氨酸或色氨酸残基，且所述突变葡糖脱氢酶相比SEQ ID NO:3所示的葡糖脱氢酶对葡萄糖的底物特异性提高；其中二重或更多重突变选自：二重突变365Y+(326Q/V,472F/I/N/D/E/H/Y或475H/S)和365F+472F；三重突变472D+475H+365F、472D+475H+(S365F/D/H/R/W/Y/V)、472Y+475H+(S365F/D/H/R/W/Y/V)、472F+475S+(S365F/D/H/R/W/Y)、472F+475H+S365Y，472D+475H+(S326Q/V)，472D+475H+(529Y/H/W)；四重突变472D+475H+529H+326Q和472D+475H+529W+326Q。