一种提取胡萝卜花粉小孢子的方法

摘要

本发明公开了一种提取胡萝卜花粉小孢子的方法。该方法包括如下步骤：1）将经过消毒的胡萝卜花序置于直径为70～90mm的研钵中，加入B5液体培养基，用锤头直径为25～30mm的研锤挤压花蕾释放小孢子，得到悬浮液；2）用400目孔径的滤网过滤步骤1）所得悬浮液，收集滤液；3）对步骤2）所得滤液依次按照如下a）-c）的步骤进行梯度离心，获得小孢子：a）150～155g离心4～6min，弃上清，收集沉淀；b）用所述B5液体培养基悬浮步骤a）所得沉淀，125～130g离心4～6min，弃上清，收集沉淀；c）用所述B5液体培养基悬浮步骤b）所得沉淀，105～110g离心4～6min，弃上清，收集沉淀。本发明方法可增加小孢子提取数量，提高培养效率，操作简便，同时还能最大程度减少组织碎片等杂质对小孢子离体培养的影响。

主权项

一种提取胡萝卜花粉小孢子的方法，包括如下步骤：(1)将经过消毒的胡萝卜花序置于直径为90mm的研钵中，加入B5液体培养基，用锤头直径为25mm的研锤挤压花蕾释放小孢子，得到悬浮液；(2)用400目孔径的滤网过滤步骤(1)所得的悬浮液，收集滤液；(3)对步骤(2)所得的滤液依次按照如下(a)‑(c)的步骤进行梯度离心，获得小孢子：(a)153g离心5min，弃上清，收集沉淀；(b)用所述B5液体培养基悬浮步骤(a)所得沉淀，129g离心5min，弃上清，收集沉淀；(c)用所述B5液体培养基悬浮步骤(b)所得沉淀，106g离心5min，弃上清，收集沉淀；步骤(1)中，所述胡萝卜花序为小孢子处于单核晚期的胡萝卜花序；步骤(1)中，所述胡萝卜花序的用量为15‑20个；所述B5液体培养基的用量为2mL。