灵芝三萜酸深层发酵提取工艺方法

摘要

本发明涉及一种灵芝三萜酸发酵提取工艺方法，具体涉及一种能有效提高产量的灵芝三萜酸深层发酵提取工艺方法，属于生物发酵技术领域。一种灵芝三萜酸深层发酵提取工艺方法，包括如下步骤：(1)配置培养基：所述培养基主要由以下组分配制而成(W/V)：葡萄糖25.0-27.0g/L，玉米粉10.2-12.2g/L，麸皮粉9.8-11.8g/L和蛋白胨4.9-6.9g/L；(2)发酵培养；(3)提取分离。本发明所提供的灵芝三萜酸深层发酵提取工艺方法能有效解决现有技术中灵芝子实体栽培资源浪费，三萜酸培养提取时间长，有效提取率和纯度不高，不易进行大规模工业化生产的问题。

主权项

一种灵芝三萜酸深层发酵提取工艺方法，其特征在于：所述灵芝三萜酸深层发酵提取工艺方法包括如下步骤：(1)配置培养基：所述培养基主要由以下组分配制而成(W/V)：葡萄糖25.0‑27.0g/L，玉米粉10.2‑12.2g/L，麸皮粉9.8‑11.8g/L和蛋白胨4.9‑6.9g/L；(2)发酵培养：在培养基中添加400‑500mg/L的桔梗水提物或180‑220mg/L的金银花和枸杞醇提物，之后接入灵芝种子培养物进行发酵培养，发酵培养条件如下：发酵起始pH值为5.5‑6.5，温度为28‑32℃，摇床转速为150‑170r/min，发酵时间为166‑170h；发酵过程结束后将得到的灵芝发酵菌体烘干至恒重；所述灵芝种子培养物为灵芝菌丝体或灵芝子实体；(3)提取分离：包括以下步骤：①将干燥至恒重的灵芝发酵菌体粉碎后萃取三至四次，所述萃取方法为：先将灵芝发酵菌体的粉碎物与氯仿提取液按0.8‑1.2:14(W:V)比例混合，接着将该混合液与浓度为4.8‑5.2％(W:V)的NaHCO₃溶液按照2.8‑3.2:1(V:V)比例混合，浸泡22‑26h后，提取萃取液，将剩余物质按照本方法进行下一次萃取；之后将几次萃取获得的萃取液合并，利用超声辅助设备，在380‑420W超声输出功率下，采用50‑60kHz的超声频率，超声处理28‑32min，停滞8‑12min，再次超声处理28‑32min；然后过滤分离；②过滤分离后得到滤液α和滤渣；先将滤渣按0.8‑1.2:8(W:V)比例加入浓度为4.8‑5.2％(W:V)NaHCO₃溶液，利用超声辅助设备，在380‑420W超声输出功率下，采用50‑60kHz的超声频率，超声处理28‑32min，停滞8‑12min，再次超声处理28‑32min，之后利用孔径为0.4‑0.5μm的微孔滤膜过滤得到滤液β；接着将滤液α和滤液β合并，开启分散机，调整转速至4800‑5200r/min，分散18‑22min，得上清液；之后在3.8‑4.2℃冰浴条件下，将上清液用5.8‑6.2mol/L的稀盐酸进行酸化至pH＝2.8‑3.2，得到酸化液；③将酸化液用等体积的氯仿提取液萃取3‑5次后，收集并合并萃取液，将萃取液静置35‑45min，用孔径0.4‑0.5μm的微孔滤膜过滤，得到黄色清液；④将黄色清液在44‑46℃条件下减压蒸干得到黄色粘稠液体，将黄色粘稠液体在58‑62℃水浴条件下干燥烘干至恒重；步骤①和步骤③所述的氯仿提取液是由氯仿和无水乙醇按照95:5‑98:2的体积配比配制而成。