高效液相色谱串联质谱技术检测血清中10种类固醇激素的方法

摘要

本发明公开了高效液相色谱串联质谱技术检测血清中10种类固醇激素的方法，所述的10种类固醇激素分别为：脱氢表雄酮、睾酮、双氢睾酮、雄烯二酮、雌酮、皮质酮、孕酮、孕烯醇酮、17α-羟孕酮和17-羟孕烯醇酮；采用高效液相色谱串联质谱技术检测经过预处理的血清中的上述10种类固醇激素，先利用高效液相色谱将10种类固醇激素分离，再利用质谱同位素内标定量法，以标准品与内标物的浓度比为X轴，标准品与内标物的峰面积比为Y轴，建立校准曲线，计算上述10种类固醇激素的含量。本发明方法灵敏度高、特异性强、准确且前处理过程较简单，10min之内可完成多种激素的分离和检测，精密度与加标回收率基本满足要求。

主权项

高效液相色谱串联质谱技术检测血清中10种类固醇激素的方法，其特征在于，所述的10种类固醇激素分别为：脱氢表雄酮、睾酮、双氢睾酮、雄烯二酮、雌酮、皮质酮、孕酮、孕烯醇酮、17α‑羟孕酮和17‑羟孕烯醇酮；采用高效液相色谱串联质谱技术检测经过预处理的血清中的上述10种类固醇激素，先利用高效液相色谱将10种类固醇激素分离，再利用质谱同位素内标定量法，以标准品与内标物的浓度比为X轴，标准品与内标物的峰面积比为Y轴，建立校准曲线，计算上述10种类固醇激素的含量，具体色谱条件为：(1)高效液相色谱条件：流动相A：0.1％v/v甲酸水溶液；流动相B：0.1％v/v甲酸的甲醇溶液；色谱柱型号：Phenomenex C18 100mm×2.1mm，2.6μm；采用梯度洗脱的方式，见表1；流速为0.5mL/min，柱温为35℃，进样体积为20μL；表1 流动相梯度洗脱参数(2)质谱条件：在电喷雾电离正离子检测模式下，采用多反应监测的质谱扫描模式；喷雾电压为5500V；碰撞气为Medium；气帘气为40kPa；离子源雾化气和加热辅助气均为60kPa；去溶剂温度为550℃；同时监测了目标物孕酮(m/z 345.093→124.1)、孕烯醇酮(m/z 332.0→86.2)、17α‑羟孕酮(m/z 361.0→112.2)、17‑羟孕烯醇酮(m/z 348.0→330.3)、雄烯二酮(m/z 317.0→112.2)、脱氢表雄酮(m/z 304.2→253.2)、睾酮(m/z 304.1/112.2)、双氢睾酮(m/z 306.2→81.1)、皮质酮(m/z 410.0→377.2)和雌酮(m/z 286.0→253.0) 以及同位素内标d2‑雌酮(m/z 288.0→255.1)、d6‑脱氢表雄酮(m/z 310.3→219.2)、d8‑17α‑羟孕酮(m/z 269.2→115.1)和d3‑睾酮(m/z 307.0→112.2)；各个目标物的去簇电压、碰撞电压和碰撞池出口电压参数见表2；表2 10种类固醇激素质谱参数