活性蛋白基因在芦荟中融合表达应用的方法

摘要

本发明公开了一种活性蛋白基因在芦荟中融合表达应用的方法，先构建植物转基因载体，用植物转基因载体的质粒分别转化LBA4404和EHA105农杆菌，划线培养，取单菌落做菌落PCR鉴定得到转化子进行培养并收集菌体悬浮于等体积MS培养基中，浸染芦荟愈伤组织，除去芦荟愈伤组织上的农杆菌，把浸染后的芦荟愈伤组织放到MS分化培养基上培养；用MS培养基中漂洗芦荟愈伤组织至彻底洗去农杆菌，除去水分；芦荟愈伤组织置于含Kan和头孢霉素抗生素的MS分化培养基上培养至组织下部生出白色根；把芦荟组织放到阴凉地方种植于营养土上，采用22度1000-2000lux光照培养即得芦荟植株。用本发明生产的芦荟凝胶汁液，富含活性肽，易保存，生产成本低，适于大批量生产。

主权项

一种活性蛋白基因在芦荟中融合表达应用的方法，其特征在于，包括以下步骤:(一)、构建pCOMBIA 1301+MT/EGF、pCOMBIA 1301+MT/AFGF、pCOMBIA 1301+MT/BFGF、pCOMBIA 1301+MT/KGF、pCOMBIA 1301+MT/PIGF、pCOMBIA 1301+EGF/AFGF、pCOMBIA 1301+EGF/BFGF、pCOMBIA 1301+EGF/KGF、pCOMBIA 1301+EGF/PIGF、pCOMBIA1301+PDGF、pCOMBIA 1301+MT/PIGF‑2、pCOMBIA 1301+EGF/PIGF‑2、pCOMBIA 1301+adiponect in植物转基因载体；(二)、用步骤(一)中的13个植物转基因载体的质粒分别转化LBA4404和EHA105农杆菌，划线培养，挑取单菌落做菌落PCR鉴定，得到正确的转化子进行培养；(三)、培养至0D600＝0.1‑0.2，收集菌体悬浮于等体积MS培养基中，浸染芦荟愈伤组织15‑30分钟；(四)、除去芦荟愈伤组织上的农杆菌，把浸染后的芦荟愈伤组织放到MS分化培养基上培养；三天后用含抗生素Kan和头孢霉素的液体MS培养基中漂洗芦荟愈伤组织至彻底洗去农杆菌，除去水分；(五)、除去水分后的芦荟愈伤组织置于含Kan和头孢霉素抗生素的MS分化培养基上培养，1个月后愈伤组织生出芽来，继代培养，2个月后生出小叶，叶长大至2‑3cm后，继代生根培养基继续培养，1‑2个月愈伤组织下部生出2‑3根白色根；(六)、把芦荟组织放到阴凉地方种植于营养土上，采用22度1000‑2000lux光照培养得到能特异表达目的蛋白的芦荟植株。