一种可同时检测多个HBV耐药突变位点的新方法

摘要

乙型肝炎病毒基因突变是导致病毒耐药的基础，现阶段的检测技术存在着较低的灵敏度、价格较贵、操作不够简便、数据分析工作量大或存在碱基错配等缺点。本发明提供了一种高灵敏度的COLD-PCR联合测序技术并将其应用于HBV已知和未知多个耐药突变的检测，具有高度灵敏、简便、价廉和实用的优点。

主权项

一种可同时检测多个乙型肝炎病毒耐药突变位点的试剂盒，其特征在于其包含如SEQ ID No.1‑2所示的一对引物以及以下操作步骤中所用到的试剂：1)提取乙型肝炎病毒 DNA，并以如SEQ ID No.1‑2所示的一对引物为扩增引物进行扩增，测定扩增产物的熔解温度 Tm ;依据熔解温度 Tm，通过改变扩增变性温度确定关键变性温度 Tc ;2)通过 Tc 建立 COLD‑PCR 反应体系条件并反应得到 COLD‑PCR 产物;
3)将 COLD‑PCR 产物进行 sanger 双向序列测定。