一种低假阳性率的蛋白质相互作用检测方法

摘要

本发明是一种低假阳性率的蛋白质相互作用检测方法，涉及一种检测系统，属于分子生物技术领域。本发明利用基于荧光蛋白的双分子荧光互补技术，将通常需要两个基于单表达质粒载体的BiFC检测体系构建到一个双表达质粒载体系统中，可以明显降低BiFC检测方法在蛋白质-蛋白质相互作用研究中的假阳性率，并可实现定量分析。本发明还可用于基于基因文库的未知蛋白质-蛋白质相互作用的筛选研究，以及活体动物内的蛋白质-蛋白质相互作用检测。

主权项

一种低假阳性率的蛋白质相互作用检测方法，其特征在于，包括以下步骤:1)将荧光蛋白在特定位点切割成两个蛋白序列片段，荧光蛋白的N端和C端分别命名为FPN和FPC；2)将待测目标蛋白A的DNA序列与FPN基因序列同时插入到双表达载体中的一个启动子的下游，另一个待测蛋白B和与FPC基因序列同时插入双表达载体中的另一个启动子下游，从而构建了基于双表达载体的双分子荧光互补系统；所述双表达载体中的两个启动子在同一载体中启动基因表达的能力相当；3)将同时含有待测目标蛋白A和B的双分子荧光互补系统转染细胞，培养16～24小时以后，使用荧光显微镜观察光源刺激前后是否存在荧光；如果两目标蛋白存在相互作用，则荧光蛋白的N端和C端靠近，从而自发重组为完整荧光蛋白，产生荧光信号；如果没有或者只有极其微弱荧光，证明两目标蛋白之间无相互作用。