一种基于合成单链DNA文库快速高效组合进化DNA的方法

摘要

本发明公开了一种基于合成单链DNA文库快速高效组合进化DNA的方法，属于基因工程技术领域。本发明先后或同时构建DNA单链突变体文库和双链突变体文库，将突变文库重组表达载体后转化宿主进行高通量筛选进化突变株。本发明采用此技术，成功对启动子、酶和代谢途径进行体外改造，获得了性质非常优异的突变株。本方法实现了基因的快速体外进化，操作简单，可用于调控序列如启动子、核糖体结合位点等基因的快速定向进化，特别适合于对基因内部引入丰富的突变多样性，进行快速定向进化。

主权项

一种快速高效组合进化DNA的方法，其特征在于，主要包括制备单链突变体文库、制备双链突变体文库、筛选突变体，单链突变体文库与双链突变体文库分开或同步构建；为构建单链突变体文库，针对亲本基因的各个目标突变区域，分别设计引物，各引物方向相同，并通过向PCR体系中添加DNA连接酶来连接各发生突变的核苷酸片段，得到完整的单链突变体；为构建双链突变体文库，单链突变体的两端需带上额外的锚点序列，便于在双链化时，设计用于特异性扩增单链突变体的引物。