一种无创制作细菌性肺炎动物模型的方法

摘要

本发明公开了一种无创制作细菌性肺炎动物模型的方法，取菌株ATCC25922接种于血琼脂培养皿，37℃培养18-24h，挑取单菌落接种THB液体培养基，37℃，200rpm/min振荡培养12h，离心浓缩后，据预实验结果，用无菌PBS制备1.2×10⁹CFU·mL^-1细菌悬液，4℃保存，2h之内用于接种实验动物。

主权项

一种无创制作细菌性肺炎动物模型的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、菌株与细菌培养大肠埃希菌标准菌株由天津市临床检验中心提供，菌株号：ATCC25922，取菌株ATCC25922接种于血琼脂培养皿，37℃培养18‑24h，挑取单菌落接种THB液体培养基，37℃，200rpm/min振荡培养12h，离心浓缩后，据预实验结果，用无菌PBS制备1.2×10⁹CFU·mL^‑1细菌悬液，4℃保存，2h之内用于接种实验动物；步骤2、实验动物清洁级Wistar雄性大鼠60只，月龄3‑6个月，体重180士20g，由北京华阜康生物科技股份有限公司提供，动物合格许可证号：SCXK(京)2009‑0004；实验大鼠喂养在天津实验动物中心，饲养环境室内相对湿度为50％‑60％，温度控制在18‑22℃；常规饲料喂养，自由饮用水，按时通风冲刷粪便，保持环境安静，适应性喂养1周后开始实验；步骤3接种细菌采用内窥镜引导下气管内灌注的滴注菌液方式，设备采用鼻0度4#硬式内窥镜、氙灯冷光源及松下KS‑822摄录监视系统；将大鼠置于直径为26cm的干燥器内乙醚麻醉，麻醉满意后迅速将鼠从麻醉器中取出，呈仰卧位状以弹力固定夹将其四肢分别固定于鼠板上；两名操作者并排位于鼠头顶方向，首先助手以左手持鼠麻醉喉镜，自鼠上唇齿伸入口腔、提压鼠舌，伸至鼠会厌缘处时提拉鼠舌根，以右手持牵拉套圈，套住鼠上列长尖牙门齿，左右手同时相反方向上下牵拉舌根与长尖牙门齿，使鼠自唇齿至喉部间上呼吸畅通暴露声门区域，此时主操作者以左手持0度硬式内窥镜，右手持7号长针注射器，内装定量造模所用肺炎链球菌菌悬液，在监视器显示引导下将7号长注射针插入气管内，并深入声门下15～20mm，此时观察鼠的声带活动情况，当双侧声带由内收状向外展状变化时，迅速推注2ml大肠埃希菌菌液，随后注入100μl空气，此时鼠呈吸气阶段，使药物随吸气时的气流充分进入支气管内，推注完毕后，将鼠板迅速立起鼠头在上左右翻转8～10秒，空白组不做处理，盐水对照组注入同等量的无菌生理盐水；解除鼠四肢弹力固定夹将鼠放回鼠笼内待复苏，鼠复苏时间为30～60秒，然后置于恒温动物房饲养；接种后每日观察其活动、取食、精神的一般情况，记录相应数据。