一种无创制作慢性阻塞性肺疾病急性加重动物模型的方法

摘要

本发明公开了一种无创制作慢性阻塞性肺疾病急性加重动物模型的方法，采用内窥镜引导下气管内灌注的滴注菌液方式，设备采用鼻0度4#硬式内窥镜、氙灯冷光源及松下KS-822摄录监视系统；将大鼠置于直径为26cm的干燥器内乙醚麻醉，麻醉满意后迅速将鼠从麻醉器中取出，呈仰卧位状以弹力固定夹将其四肢分别固定于鼠板上；缓慢滴注6u(0.15ml)弹性蛋白酶溶液(7.7μ/mg，Sigma公司)，随后注入100μl空气，此时鼠呈吸气阶段，使药物随吸气时的气流充分进入支气管内，鼠复苏时间30～60秒，然后置于恒温动物房饲养；接种后每日观察其活动、取食、精神的一般情况，记录相应数据。

主权项

一种无创制作慢性阻塞性肺疾病急性加重动物模型的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、菌株与细菌培养肺炎链球菌标准菌株由天津市临床检验中心提供，菌株号：ATCC49619，取菌株ATCC49619接种于血琼脂培养皿，37℃培养18‑24h，挑取单菌落接种THB液体培养基，37℃，200rpm/min振荡培养12h，离心浓缩后，备用；步骤2、实验动物清洁级Wistar雄性大鼠60只，月龄3‑6个月，体重180士20g，由北京华阜康生物科技股份有限公司提供，动物合格许可证号：SCXK(京)2009‑0004；实验大鼠喂养在天津实验动物中心，饲养环境室内相对湿度为50％‑60％，温度控制在18‑22℃；常规饲料喂养，自由饮用水，按时通风冲刷粪便，保持环境安静，适应性喂养1周后开始实验；步骤3、肺气肿动物模型构建：采用内窥镜引导下气管内灌注的滴注菌液方式，设备采用鼻0度4#硬式内窥镜、氙灯冷光源及松下KS‑822摄录监视系统；将大鼠置于直径为26cm的干燥器内乙醚麻醉，麻醉满意后迅速将鼠从麻醉器中取出，呈仰卧位状以弹力固定夹将其四肢分别固定于鼠板上；两名操作者并排位于鼠头顶方向，首先助手以左手持鼠麻醉喉镜，自鼠上唇齿伸入口腔、提压鼠舌，伸至鼠会厌缘处时提拉鼠舌根，以右手持牵拉套圈，套住鼠上列长尖牙门齿，左右手同时相反方向上下牵拉舌根与长尖牙门齿，使鼠自唇齿至喉部间上呼吸畅通暴露声门区域，此时主操作者以左手持0度硬式内窥镜，右手持7号长针注射器，内装定量造模所用肺炎链球菌菌悬液，在监视器显示引导下将7号长注射针插入气管内，并深入声门下15～20mm，此时观察鼠的声带活动情况，当双侧声带由内收状向外展状变化时，缓慢滴注6u 0.15ml弹性蛋白酶溶液7.7μ/mg，Sigma公司，随后注入100μl空气，此时鼠呈吸气阶段，使药物随吸气时的气流充分进入支气管内，推注完毕后，将鼠板迅速立起鼠头在上左右翻转15～20秒，空白组不做处理，盐水对照组注入同等量的无菌生理盐水；每7天滴入一次，共3次，造模时间21天；解除鼠四肢弹力固定夹将鼠放回鼠笼内待复苏，鼠复苏时间30～60秒，然后置于恒温动物房饲养；接种后每日观察其活动、取食、精神的一般情况，记录相应数据；步骤4、制备肺炎链球菌琼脂珠悬液：肺炎链球菌标准菌株由天津市临床检验中心提供，菌株号：ATCC49619；营养琼脂平板培养后，调整细菌浓度为2×10¹²‑6×10¹²CFU/ml，取浓缩菌液与45℃溶化的琼脂溶液等量混合，迅速注入4℃快速搅拌的脑心浸液培养基中，制成由琼脂包裹细菌的肺炎链球菌琼脂珠悬液。