从猪小肠黏膜提取肝素后的废弃物中提取黏蛋白的方法

摘要

本发明涉及利用动物组织提取黏蛋白的技术，尤其是一种从猪小肠黏膜提取肝素后的废弃物中提取黏蛋白的方法。将猪小肠粘膜提取肝素后废弃蛋白下脚料经胰蛋白酶酶解、乙醇沉淀及离子交换树脂纯化，获得高纯度的黏蛋白，其分子量在200～1000kDa之间，蛋白质含量为20～30wt％，总糖含量50～80wt％。总糖中，唾液酸含量占总糖重量的24～54％，GalN、GlcN、Gal和Fuc的重量比例为23～45：27～32：14～15：9～10。本发明利用猪小肠黏膜提取肝素后的废弃物制备黏蛋白，可以明显提高猪小肠黏膜提取肝素后废弃物的综合利用率，实现从猪小肠粘膜中提取肝素、黏蛋白及动物饲料联产，所获得的产品不仅可作为科研用生化试剂，也可用作制备人和动物免疫增强剂及神经细胞营养剂。

主权项

一种从猪小肠黏膜提取肝素后的废弃物中提取黏蛋白的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)酶解：将猪小肠黏膜肝素加工废弃物悬浮于Tris‑HCl缓冲液中，升温至37℃，加入胰蛋白酶，恒温搅拌酶解，酶解结束后，煮沸，使酶失活；(2)醇沉：将(1)中所得酶解液离心，上清液中加入乙醇进行沉淀，静置12～24h，收集沉淀，上清液旋蒸浓缩，烘干，用作动物饲料；(3)透析：将(2)中沉淀用蒸馏水复溶，转入透析袋中，透析，去除小分子物质，透析结束后，将透析内液旋蒸浓缩，冻干，获得黏蛋白粗提物；(4)纯化：将(3)所得黏蛋白粗提物用蒸馏水溶解，以蒸馏水和不同浓度的氯化钠水溶液为流动相，经强阴离子交换树脂分离纯化，硫酸苯酚法检测，合并收集含有黏蛋白的组分，蒸馏水透析，减压浓缩，冻干，获得高纯度黏蛋白。