用于扩增靶核酸的方法

摘要

本发明提供了用于扩增核酸样品中的至少一种靶核酸的方法，其包括：(a)使核酸样品片段化，以产生至少一种的靶片段，靶片段包含靶核酸并包含两个探针互补部分，其中两个探针互补部分的至少一个位于靶片段的末端；(b)使片段化的核酸样品与至少一种探针接触，探针提供有固定化部件并任选地通过部件的方式固定在固相上，探针包含与靶片段的探针互补部分在序列上互补的两个靶片段互补部分，其中探针的部分可以是相邻的，或可被居间非靶片段互补部分分开；(c)使片段化的核酸样品成为单链的，其中该步骤在步骤(b)之前或与步骤(b)同时或在步骤(b)之后发生；(d)允许靶片段的探针互补部分与探针的靶片段互补部分杂交；(e)如果在步骤(b)中提供的探针未被固定化，通过固定部件的方式使探针-靶片段杂交体在固相上固定；(f)将未固定的核酸片段与固相分开；(g)使固相与连接酶连接以直接或间接连接靶片段的5’和3’端，由此环化靶片段，其中如果靶片段的探针互补部分之一没有位于靶片段的末端，通过瓣状内切核酸酶或外切核酸酶的作用形成除了探针互补部分所位于的末端之外的另一可连接末端；和(h)扩增所述环化的靶片段。还提供了在本发明的方法中使用的试剂盒。

主权项

用于扩增核酸样品中的至少一种靶核酸的方法，其包含：(a)使所述核酸样品片段化，以产生至少一种靶片段，所述靶片段包含所述靶核酸并包含两个探针互补部分，其中所述两个探针互补部分的至少一个位于所述靶片段的末端；(b)使所述片段化的核酸样品与至少一种探针接触，所述探针具有固定化部件并任选地通过所述部件固定在固相上，并且所述探针包含与所述靶片段的所述探针互补部分在序列上互补的两个靶片段互补部分，其中所述探针的所述部分可以是紧邻的，或可被居间非靶片段互补部分分开；(c)使所述片段化的核酸样品成为单链的，其中所述步骤可在步骤(b)之前、与步骤(b)同时或在步骤(b)之后发生；(d)允许所述靶片段的所述探针互补部分与所述探针的所述靶片段互补部分杂交；(e)如果在步骤(b)中提供的所述探针未被固定化，通过所述固定化部件使所述探针‑靶片段杂交体固定在固相上；(f)将未固定的核酸片段与所述固相分离；(g)使所述固相与连接酶接触，以直接或间接连接所述靶片段的可连接的5'和3'端，由此环化所述靶片段，其中如果所述靶片段的所述探针互补部分之一没有位于所述靶片段的末端，通过瓣状内切核酸酶或外切核酸酶的作用生成除探针互补部分所位于的末端之外的另一所述可连接末端；和(h)扩增所述环化的靶片段。