一种利用蜈蚣草茎叶匀浆快速获得其组培苗的方法

摘要

本发明涉及一种利用蜈蚣草茎叶匀浆快速获得其组培苗的方法，属植物组织培养技术领域。本发明方法是指将蜈蚣草的不同外植体，经过无菌处理，预培养之后，将外植体进行愈伤组织诱导培养，愈伤组织转入增殖培养基，形成绿色球状体(GGB)，GGB经过两次分化培养后，获得小苗和新的愈伤组织，将小苗进行生根培养，新的愈伤组织进行增殖培养形成GGB，周而复始，从而获得大量组培苗。本发明的有益效果是：外植体污染率低；外植体无褐化现象，形成了蜈蚣草快繁的技术效果；能够直接分化成新的组培苗，大大缩短了蜈蚣草的繁殖周期，有利用于工厂化大批量生产，形成繁殖系数高的技术效果；采用不同的光照强度避免了愈伤和分化苗的玻璃化，形成了良好的培养效果。

主权项

一种利用蜈蚣草茎叶匀浆快速获得其组培苗的方法，包括外植体选择、外植体无菌处理、蜈蚣草诱导预培养、蜈蚣草诱导培养、蜈蚣草增殖培养基、蜈蚣草分化培养、及蜈蚣草生根培养步骤；其特征在于：a.外植体选用蜈蚣草幼嫩叶片和刚从地下冒出4‑6厘米的幼芽；b.蜈蚣草诱导预培养是将幼芽接种到预培养基上形成幼孢子体，预培养基为：1/2MS+琼脂粉7.8g/L+蔗糖10g/L，PH5.8‑6.0；c.蜈蚣草诱导培养是将幼孢子体和无菌处理好的幼嫩叶片，切成小段，接入诱导培养基上，每皿接种20‑25个，置于温度25.8‑26℃，湿度60％‑70％的培养箱中暗培养，一周后转到温度和湿度与暗培养相同，光照2000Lux，光照时间12小时的培养箱中继续培养；诱导培养基为：1/2MS+2,4‑D 2mg/L+80g/L的蜈蚣草茎干和叶匀浆+琼脂粉7.8g/L+蔗糖20g/L，PH5.8‑6.0；或1/2MS+2,4‑D2mg/L+60g/L的蜈蚣草茎干和叶匀浆+琼脂粉7.8g/L+蔗糖20g/L,PH5.8‑6.0；d.蜈蚣草增殖培养是将愈伤组织转入增殖培养基上，每皿转接10‑15个愈伤组织，此时温度、湿度、光照条件与愈伤组织诱导培养一致，12天后，愈伤组织长到1‑1.5厘米的绿色球状体；增殖培养基为：1/2MS+2,4‑D0.5mg/L+100g/L的蜈蚣草茎干和叶匀浆+琼脂粉7.8g/L+蔗糖20g/L，PH5.8‑6.0；e.蜈蚣草分化培养是两次分化培养，即：将增殖后的愈伤组织切成0.3‑0.5厘米，接入分化培养基中进行分化培养，温度25.8‑26℃，湿度50％‑60％，光照强度3000Lux，光照时间12小时，一周后将光照调至4000Lux，出现黄绿色小颗粒，继续分化培养7天后，绿色颗粒随着长大，并长出芽点和纤细小苗，为第一次分化，分化培养基为：1/2MS+6‑BA2mg/L+NAA0.2mg/L+120g/L的蜈蚣草茎干和叶匀浆+琼脂粉7.8g/L+蔗糖20g/L，PH5.8‑6.0；接着又将光照调回3000Lux，将长出的芽点和纤细小苗，重新接入新的分化培养基中继续进行分化培养，7天后，分化的芽点已经长成独立小苗同时又长出新的丛生芽点和新的愈伤，这个周期为第二次分化培养，分化培养基为：1/2MS+6‑BA1mg/L+NAA0.2mg/L+200g/L的蜈蚣草茎干和叶匀浆+琼脂粉7.8g/L+蔗糖20g/L，PH5.8‑6.0；f.生根培养是指将绿而壮的小苗接入生根培养基中生根培养，将3‑4厘米绿而壮的小苗接入装有30毫升生根培养基的玻璃试管中，温度25.8‑26℃，湿度50％‑60％，光照强度3000Lux，光照时间12小时，进行生根培养，15‑20天后，根芽长出，27天后，主根长2厘米，此时的生根苗即能假植；生根培养基为：1/4MS+NAA0.2mg/L+琼脂粉7.8g/L+蔗糖15g/L，PH5.8‑6.0。