一种利用发酵法从牛胆汁中提取胆红素的方法

摘要

本发明提供一种利用发酵法从牛胆汁中提取胆红素的方法，主要包括牛胆汁的发酵、牛胆汁发酵液的灭菌、胆红素的形成、胆红素的提取与精制等四个步骤。本发明主要将高产β-葡萄糖醛酸苷酶且耐胆汁的产气荚膜梭状芽胞杆菌加入到动物胆汁中并进行发酵，通过加入巯醇类还原剂起到提高β-葡萄糖醛酸苷酶的活性和抗氧化剂的作用，在特殊条件的控制下使得整个工艺得到极大的优化，提高生产效率，降低成本，最终得到胆红素产品的收率在0.010-0.014%之间，其纯度达到92%以上。

主权项

一种利用发酵法从牛胆汁中提取胆红素的方法，其特征在于：步骤如下：（1）将产气荚膜梭状芽胞杆菌的菌株在液体培养基中进行扩大培养 22‑24h,得到扩增菌液；向过滤后的新鲜牛胆汁中加入扩增菌液在温度为28‑32℃条件下进行发酵45‑48h，得到发酵液，发酵过程中维持发酵液的pH为5‑6；所述扩增菌液的体积为新鲜牛胆汁体积的9‑11%；（2）向上步所得的发酵液中加入溶菌酶，在温度为37‑38度条件下进行酶解30‑50min后，调节其pH值为6.8‑7.5，得到裂解液；所述溶菌酶在发酵液中的质量体积浓度为0.2‑0.25g/L;（3）向上步所得裂解液中加入浓度为10%的NaOH溶液，调节其pH 为11‑12，得到皂化液；（4）将上步所得皂化液加热煮沸1‑3min，过滤，收集滤液，冷却至室温后向滤液中依次加入抗氧化剂溶液、乙酸乙酯，然后加入混合酸调节其pH为5‑5.5，充分搅拌后静置分层，首次取乙酸乙酯层；用饱和NaCl的HCl溶液对前述乙酸乙酯层进行二次酸化萃取，静置分层后再次取乙酸乙酯层进行蒸馏回收，得到的粗品胆红素；所述抗氧化剂为抗坏血酸或亚硫酸氢钠，抗氧化剂溶液的质量浓度为1%，抗氧化剂溶液与滤液的体积比为1:100；所述乙酸乙酯的体积为滤液体积的50‑60%，所述混合酸为HCl和HAc，其中HCl和HAc的体积比为1:（4‑5)；再次酸化萃取时饱和NaCl的稀HCl溶液的体积为首次取得的乙酸乙酯层体积的30%；（5）将上步所得粗品胆红素用温度为60‑70℃的无水乙醇进行2次以上溶解洗涤，降温冷却结晶得胆红素精制品。